摘要
目的： 探讨颅脑爆震伤对小鼠视网膜的损伤及PI3K/Akt信号通路和视网膜凋亡相关蛋白的表达情况。 方法： 1.实验动物模型建立：将6-8周龄C57小鼠腹腔麻醉（2%戊巴比妥钠1.5ml/kg)后放于高仿真爆震伤模型装置的网状部，将小鼠头部显露，同时注意保护小鼠其他部位并充分固定，将厚度约0.8mm的铝薄放于高仿真爆震伤模型装置中间部，将空气压缩装置固定位于其下方。装置通电后当压力（空气压缩装置炮筒显示压力达0.l-0.14MPa)达到临界水平时，压力可导致铝膜破裂。 2.实验动物分组：将60只雄性小鼠随机分为对照组和实验组（三组均为20只雄性小鼠，其中实验组两组，对照组一组）。将实验组根据实验动物模型建模成功后取样时间分为两组，分别为6小时实验组及48小时实验组。 3.实验观察方法：通过H E染色观察实验动物视网膜病理变化，采用Image J软件检测各组视网膜神经节细胞（Retinal ganglion cells，R G C s)数目以及视网膜全层、神经纤维层（Nerve fiberlayer，N F L)厚度；采用TUNEL法检测视网膜组织凋亡情况，采用Western Blot检测视网膜中p-PI3K、p-Akt、B a x、Bcl-2及CytochromeC蛋白相对表达情况。 4.统计方法：采用SPSS25.0软件对数据进行统计学分析，三组组间可采用t检验，检验结果以^lt;0.05为差异具有统计学意义。 结果： 1.HE染色结果： (1)与对照组相比，两组实验组（6小时组及48小时组）RGC细胞个数均明显降低（两组P值均小于0.05)，差异具有统计学意义，视网膜全层厚度未见明显差异（两组P值均大于0.05)； (2)与6小时组相比，48小时组R G C细胞个数明显降低（Plt;0.05)，差异具有统计学意义。 2.TUNEL染色结果： (1)与对照组相比，两组实验组（6小时组及48小时组）视网膜细胞凋亡率明显升高（两组P值均小于0.05)，差异具有统计学意义； (2)与6小时组相比，48小时组视网膜细胞凋亡率升高（Plt;0.05)，差异具有统计学意义； 3.Western Blot检测结果： (1)与对照组相比，两组实验组（6小时组及48小时组）p-PI3K、p-Akt、B a x、Bcl-2及Cytochrome C蛋白表达均明显升高（两组P值均小于0.05)，差异具有 统计学意义； (2)与6小时组相比，48小时组中p-PI3K、p-Akt及Cytochrome C蛋白表达升高（Plt;0.05)，差异具有统计学意义； (3)与6小时组相比，48小时组中Bax/Bcl-2结果未见明显差异（Pgt;0.05)。 结论： 1.根据HE染色结果显示，爆震冲击波可导致视网膜损伤，实验组视网膜神经节细胞层细胞数目明显减少，细胞排列紊乱，新生血管增多，随时间延长视网膜组织损伤加重。 2.观察冲击波暴露后视网膜发生凋亡情况，可对视网膜切片，采用TUNEL染色进行检测，检测到实验组在冲击波后6小时，神经节细胞层细胞及内核层已经开始发生凋亡，在冲击波暴露后48小时凋亡变得更加明显。 3.根据WesternBlot结果显示，暴露于冲击波后视网膜组织中凋亡蛋白如Bax和细胞色素C蛋白相对表达量显著增加，证明了爆震伤后视网膜凋亡的发生，此项观察结果与Tunel染色结果一致。视网膜组织中磷酸化P I3K及A k t蛋白表达明显高于对照组表达水平，这一实验结果证实了爆震冲击后视网膜PI3K/Akt信号通路的异常激活，PI3K/Akt信号通路的异常激活参与了爆震伤后视网膜损伤及凋亡过程。
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