摘要
牙周炎（Periodontitis）是一种复杂的慢性炎症感染性疾病。机体的一系列免疫性应答反应由牙龈受微生物、机械、化学等不良刺激引起，首先导致牙龈的炎症。牙菌斑微生物所造成的牙龈炎症一直被认为是发生牙周炎严重程度的关键风险因素。而牙龈卟啉单胞菌首先被证明是牙周病的关键病原体。控制牙龈炎对于预防牙周炎至关重要，管理牙龈炎是预防牙周炎的关键策略，也是预防牙周炎复发的辅助策略。葡萄籽原花青素（Grape seed proanthocyanidins,GSPs）已经被证明是一种天然的抗氧化剂，它具有抗炎级和免疫调控作用等多重治疗功效，同时也具有较低的药物毒性。 目的： 本实验通过研究葡萄籽原花青素对人牙龈上皮细胞（Human gingival epithelial cells，HGEs）增殖活性及脂多糖诱导的炎症反应的影响，探讨葡萄籽原花青素对人牙龈上皮细胞是否具有毒性及对炎症是否具有预防作用，为牙周炎的预防及治疗寻求安全、高效的天然产物提供理论基础，促进安全、高效的天然产物对牙周炎的防治进一步深入。 方法： 用含有不同浓度GSPs(0、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL）的细胞培养液在96孔板中分别处理HGECs6h、12h、24h、48h后加入100μL培养基和10μLCCK-8的无血清试剂混合液，3h后检测吸光度（OD值）。根据CCK-8结果选择10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL处理细胞24h后加入1.0μg/mL LPS刺激24h，对肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-4（interleukin-4，IL-4）、白介素-10（interleukin-10，IL-10）、转化生长因子（transforming growth factor-beta,TGF-β）的含量采用ELISA法进行检测；实时定量荧光PCR（Quantitative Real-time PCR）检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10、TGF-β基因表达水平。 结果： 1.CCK-8结果显示：与对照组相比，当GSPs浓度在0-40μg/mL对细胞增殖无明显影响，同时当作用时间达到24h，细胞增殖速率明显增高。 2.ELISA及QRT-PCR结果显示：GSPs能够有效降低促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平，而抗炎细胞因子IL-4、IL-10、TGF-β的表达水平提高。 结论： 当GSPs浓度在0-40μg/mL时对HGECs增殖活性无明显影响，且GSPs作用时间达到24h对细胞增殖有明显促进作用。GSPs能够通过抑制促炎细胞因子水平同时提升抗炎细胞因子水平，减轻脂多糖引起的炎症反应，对HGECs抵抗内毒素的刺激起到一定的预防作用。
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