摘要
微生物胞外多糖(EPS)是由微生物分泌到其周围环境中的生物聚合物，具有调节免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、改善肠道菌群等生理功能，在食品、医药等领域有广泛应用。本文对类芽孢杆菌BD3526以小麦麸皮为培养基所产胞外多糖的分离纯化、结构鉴定以及体外免疫调节活性进行系统的研究，为类芽孢杆菌BD3526的开发利用提供理论依据。主要研究内容如下: (1)以小麦麸皮作为培养基对类芽孢杆菌BD3526进行液体发酵，发酵液离心、醇沉后得到粗多糖BD-EPS，采用考马斯亮蓝法、苯酚-硫酸法、硫酸-咔唑法对BD-EPS的理化性质进行测定，BD-EPS的中性糖、糖醛酸和蛋白质含量分别为28.5％、19.29％和0.59％;通过DEAESepharoseFastFlow阴离子交换柱层析对BD-EPS进行分级分离，获得均一多糖BD0.4。 (2)通过红外光谱、PMP柱前衍生化-高效液相色谱、甲基化分析、一维/二维核磁共振波谱、部分酸水解、多检测器高效凝胶过滤色谱等手段对BD0.4的一级结构进行鉴定。BD0.4的重均分子量(Mw)，数均分子量(Mn)和Z均分子量(Mz)分别为376kDa，225kDa和940kDa，多分散指数Mw/Mn为1.67;BD0.4是由葡萄糖醛酸、葡萄糖和岩藻糖以摩尔比1.58∶1∶1.66组成的酸性杂多糖，其主链由1，3-连接的葡萄糖残基、1，3-连接的岩藻糖残基、1，3，4-连接的岩藻糖残基和1，4-连接的葡萄糖醛酸残基构成，分支点位于1，3，4-连接的岩藻糖残基O-4位，支链由末端连接的葡萄糖醛酸残基构成。 (3)利用刚果红实验、多检测器高效凝胶过滤色谱和原子力显微镜等手段对BD0.4的高级结构进行测定，BD0.4在水溶液中不具有三螺旋结构，链构象为刚性棒状。利用扫描电子显微镜分析BD0.4的微观形貌。BD0.4在干燥状态下表面光滑，整体有丝状和片状结构。 (4)以小鼠巨噬细胞RAW264.7为体外免疫活性模型，通过MTT实验、中性红吞噬实验及酶联免疫实验研究BD0.4的免疫调节活性。BD0.4在0～100μg/mL时，对巨噬细胞无毒性，能够增强巨噬细胞吞噬中性红的能力，显著刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-6和IL-1β，并呈剂量依赖性。上述结果表明，BD0.4具有较强的免疫调节活性。
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