摘要
背景与目的: 肝细胞癌（HepatocellularCarcinoma，HCC，简称肝癌）是全世界最常见的恶性肿瘤之一。手术切除一直是HCC首选且最重要的治疗方法。手术治疗的效果和临床分期有很大的关系。早期HCC患者接受根治性切除术后的5年生存率约70％。虽然近年来在HCC的预防和诊断方面取得了很大的进展，但大多数HCC患者在确诊时已属中晚期，失去根治性手术切除的机会，因此预后仍然不理想。因此除了早期诊断外，基于对患者预后预测制定的及时的治疗方案也有助于延长患者的生存期。而这一方向迫切需要更进一步的研究来发现在HCC患者预后中具有更高敏感性和特异性的肿瘤生物标志物。通过更好的了解恶性肿瘤发生和复发的机制，可能会发现新的治疗靶点，以确定最佳的治疗方案及降低复发。近年来，大量数据已经证实，肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor-InfiltratingLymphocytes，TILs)可以用来预测许多肿瘤的临床预后。此外，针对免疫检查点的治疗已广泛应用于改善HCC免疫疗法的有效性。免疫检查点主要包括程序性死亡受体1(ProgrammedCellDeathProtein1，PD-1)/程序性死亡配体1(ProgrammedDeathLigand-1，PD-L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CytotoxicTLymphocyteAssociatedProtein4，CTLA-4)。这些检查点在一定程度上增强了抗肿瘤免疫，并提高了免疫系统的激活作用。在可用的免疫抑制剂中，PD-L1抑制剂目前被认为是比较有前途的。到目前为止，我们还没有明确的证据表明PD-L1可以做为免疫生物标志物以帮助鉴别那些更容易接受有效治疗或更容易发生不良事件的患者。对于所有实体肿瘤来说，目前关于PD-L1在预测抗肿瘤免疫反应方面，早期的研究结果并未显示出明显的一致性。因此，探讨TILs及PD-L1在肝癌组织和癌旁组织中的分布及其对预后的影响具有重要临床意义。 本研究目的:(1)探究肝细胞癌组织及其癌旁组织中TILs及PD-L1分布比例的差异。(2)探讨CD8+T细胞及PD-L1的表达与临床相关病理参数及预后的关系。(3)验证CD8+T细胞及PD-L1作为HCC患者预后的潜在生物标志物的临床可能性，也有助于深入研究肝癌患者的免疫治疗。 方法: 收集2017年12月15日至2019年1月9日行肝癌根治性切除术的72例患者的肝癌组织及癌旁组织标本。采用流式细胞术检测肝癌组织、癌旁组织中TILs及PD-L1的分布比例。实验数据采用SPSS22.0统计软件分析。连续变量数据以（(x)±s）表示，配对样本（肝癌组织和癌旁组织）间的差异采用非参数轶和检验。依据受试者工作特征曲线(ReceiverOperatingCharacteristicCurve，ROC)确定了CD8+T细胞及PD-L1的界值(42.6和5.8)，以此界值将CD8+T细胞及PD-L1分为高表达组和低表达组，Kaplan-Meier法进行生存分析，分析两组患者的生存时间，用Log-rank法进行两组间的生存率检验。采用单因素及多因素Cox回归分析预后的独立影响因素。 结果: 72例肝癌组织中CD3+T细胞的分布比例显著高于癌旁组织，肝癌组织中CD4+T细胞占所有CD3+T细胞的比例显著高于癌旁组织，肝癌组织中PD-L1的分布比例显著高于癌旁组织，差异有统计学意义（t值分别为:3.021、8.607、4.209，P均＜0.001）。肝癌组CD8+T细胞占所有CD3+T细胞的比例显著低于癌旁组，差异有统计学意义（t=7.052，P＜0.001）。肝癌组织中CD4+T细胞与CD8+T细胞的比值显著高于癌旁组织，差异均具有统计学意义(t=4.209，P＜0.001);肝癌组织中CD8+T细胞的分布比例在肿瘤直径(P=0.002)、TNM分期(P=0.015)中有统计学差异;肝癌组织中PD-L1的表达在肿瘤的分期中有统计学差异(P=0.029)。单因素分析显示，肿瘤的分化程度(P＜0.001)、TNM分期(P=0.001)、肿瘤组织中CD8+T细胞(P=0.001)、PD-L1的表达(P=0.021)与患者的无病生存期(disease-freesurvival，DFS)有关。多因素Cox回归分析结果显示，肿瘤的分化程度(P＜0.001)、CD8+T细胞(P=0.013)及PD-L1(P=0.039)的表达是患者术后DFS的独立影响因素。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，CD8+T细胞高表达组的DFS显著高于低表达组，PD-L1低表达组的DFS显著高于高表达组(P均＜0.05)。 结论: 1.肝癌组织中TILs的功能亚群及PD-L1的分布比例较癌旁组织发生了改变，造成了T淋巴细胞数量异常，改变了组织局部免疫微环境。 2.肝癌组织中CD8+T细胞的表达与肿瘤大小、分期有关，这更一步证明了TILs浸润是肿瘤免疫抑制发生中的一个重要因素。也提示了机体免疫力的低下是肿瘤增长及复发转移的重要因素之一。CD8+T细胞高表达是影响肝癌患者术后预后的独立影响因素，CD8+T细胞高表达组的DFS显著高于低表达组。 3.肝癌组织中PD-L1的表达与患者的临床分期有关。PD-L1是肝癌患者术后预后的独立影响因素，PD-L1高表达组的DFS显著低于低表达组，因此PD-L1也将有可能作为HCC的预后生物标志物。
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