摘要
目的利用动物感染细粒棘球蚴，通过ELISA及流式细胞术检测细粒棘球蚴病感染小鼠体内的免疫记忆性的动态变化，评价整个感染以及再次感染过程中的免疫记忆性，为该人畜共患寄生虫病的防治包括新型诊断试剂的开发以及寻找新的治疗策略提供研究基础并开辟新的途径。 方法采用随机数字表法，将小鼠随机分为3组：二次感染组、感染组和阴性对照组，每组各36只。阴性对照组小鼠不做处理，二次感染组及感染组的小鼠每只腹腔内注射新鲜的原头蚴1500个/200μlPBS。二次感染组在感染6个月后外科手术摘除包囊。手术后观察2个月后以同样方法再次感染原头蚴，于再次感染后0周、2周、4周、8周、16周、32周共6个时间点进行采样，感染组于感染后0周、2周、4周、8周、16周、32周6个时间点进行采样，每个时间点各组随机剖杀6只小鼠，进行ELISA和流式细胞术检测，观察小鼠体内免疫记忆性变化。实验数据采用SPSS25.0建立数据统计分析。 结果1二次感染组、感染组IgG、IgM的表达感染初期迅速升高后呈逐渐下降趋势，阴性对照组则相对平稳，三组之间比较存在显著差异(P<0.001)；2外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞在感染初期急剧增高，与阴性对照组形成统计学差异（P＜0.05），但两组间无统计学差异（P＞0.05），随着时间推移，两组逐渐开始下降，但二次感染组仍持续较高水平，与其他两组比较具有显著统计学意义（P＜0.001），而感染组逐渐降低至与阴性对照组统计学差异消失（P＞0.05）；3外周血TCM在感染过程中均呈逐渐增高趋势，具有统计学差异（P＜0.05），组间比较不同时间节点虽波动较明显，但二次感染组表达水平始终高于感染组与阴性对照组；4外周血TEM在感染初期即迅速增高，两组较阴性对照组具有显著差异（P＜0.001），并能维持较长时间且两组间无统计差异（P＞0.05），感染后期，两组TEM水平均开始逐渐下降，直至较阴性对照组无明显差异（P＞0.05）；5外周血TRM在三组间表达有不同程度的波动，虽组间在不同时间节点出现一过性统计学差异（P＜0.05），但三组水平表达相对平稳；6外周血记忆B细胞在二次感染组中呈逐渐上升趋势并保持在较高水平，与阴性对照组有显著差异（P＜0.001），感染组早期呈逐渐增高趋势，直至与二次感染组无明显差异（P＞0.05），后逐渐下降至与阴性对照组再无统计差异（P＞0.05）；7外周血NK细胞在感染初期呈迅速上升趋势，二次感染与感染组与阴性对照组均有显著统计学差异（P＜0.001），但两组间无统计差异（P＞0.05），感染后期，二次感染组与感染组均呈逐渐下降趋势，直至与阴性对照组再无统计差异（P＞0.05）；8与外周血相比，脾脏、淋巴结、肝脏、腹腔等组织当中流式细胞检测变化水平明显较为稳定，且组织间差异不明显。二次感染组CD4+T细胞、CD8+T细胞、TCM的外周血浓度要显著大于脾脏、淋巴结、肝脏、腹腔，而NK细胞在脾脏、淋巴结、肝脏、腹腔的浓度显著大于外周血，TEM、TRM和记忆B细胞则无明显差异。 结论1ELISA检测结果证明，细粒棘球蚴感染后，感染初期外周血IgG和IgM迅速升高后呈逐渐下降趋势；2流式细胞检测结果证明，细粒棘球蚴感染后，外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞、TEM、TCM、记忆B细胞、NK细胞的表达较阴性对照具有差异性，而TRM的表达相对较平稳；3与外周血相比，脾脏、淋巴结、肝脏、腹腔等组织当中流式细胞检测变化水平明显较为稳定，且组织间两两差异不明显；4检测外周血IgG和IgM及CD4+T细胞、CD8+T细胞、TEM、TCM、记忆B细胞和NK细胞的水平可能对CE的诊断可提供一定的依据，其中，外周血IgM和IgG及TEM、NK细胞可能作为鉴别感染早期与晚期的检验指标；TCM可作为鉴别CE初次或再次感染的检验指标；TRM可能为今后定位治疗CE提供一定的理论依据。
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