摘要
目的：通过体外培养原代大鼠支气管成纤维细胞（Ratbronchialfibroblasts，RBFs），探讨白细胞介素17A（interleukin17A，IL-17A）调控自噬对RBFs增殖、迁移及TGF-β1表达的影响。 方法：1.酶联合消化法+组织贴壁法分离和培养原代RBFs；使用免疫荧光鉴定RBFs的标志性波形蛋白证实为支气管成纤维细胞。取生长状态较好的第3～4代RBFs进行实验。 2.分组：对照组、IL-17A组、雷帕霉素(Rapamycin，Rapa）组、Rapa+IL-17A组。 3.WesternBlot检测RBFs中自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ的表达。 4.CCK8和EdU增殖染色法检测RBFs的增殖能力。 5.细胞划痕实验法检测RBFs的迁移能力。 6.ELISA法检测RBFs培养上清中转化生长因子-β1（transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1）的含量。 结果：1.分离健康SD大鼠支气管组织，经酶联消化法+组织贴壁法培养RBFs，细胞呈长梭形、三角形或多边形，有突起。经免疫荧光鉴定，该细胞波形蛋白表达呈阳性，胞浆被染成绿色，细胞核染成蓝色，证实本实验的细胞为RBFs。 2.WB结果显示，与对照组比较，IL-17A干预RBFs后，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白的表达降低（P＜0.05）；Rapa诱导RBFs自噬后，LC3Ⅱ/LC3I蛋白的表达较对照组增高（P＜0.05）；与Rapa组相比，Rapa预处理RBFs后，加入IL-17A的干预后，IL-17A可下调LC3Ⅱ/LC3I蛋白的表达（P＜0.05）。 3.CCK8及EdU增殖染色结果显示，与对照组相比，IL-17A组RBFs增殖能力增高（P＜0.05）；Rapa组RBFs增殖能力较对照组降低（P＜0.05）；与Rapa组相比，Rapa+IL-17A组RBFs的增殖能力上调（P＜0.05）。 4.细胞划痕实验结果显示，与对照组比较，IL-17A组RBFs迁移能力增强（P＜0.05）；Rapa组RBFs迁移能力较对照组降低（P＜0.05）；与Rapas组相比，Rapa+L-17A组RBFs的迁移能力上调（P＜0.05）。 5.ELISA结果显示，对照组的RBFs培养上清中有一定量的TGF-β1表达；与对照组相比，IL-17A组和Rapa组的RBFs上清中TGF-β1的表达水平增高（P＜0.05）；与IL-17A组比较，Rapa组RBFs上清中TGF-β1的表达增高（P＜0.05）；与Rapa组和IL-17A组比较，Rapa+IL-17A组RBFs上清中TGF-β1的表达水平降低（P＜0.05）。 结论：1.支气管成纤维细胞能自分泌TGF-β1。 2.IL-17A通过抑制RBFs自噬促进RBFs增殖。 3.IL-17A通过抑制RBFs自噬促进RBFs迁移。 4.IL-17A促进RBFs分泌TGF-β1的表达可能与调控自噬有关。
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