摘要
目的：观察人羊膜间充质干细胞（humanamnioticmesenchymalstromalcells,hAMSCs）移植后对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的急性肺损伤（acutelunginjury,ALI）大鼠肺上皮钠离子通道（epithelialNa+channel，ENaC）表达的影响，进一步探讨hAMSCs干预ALI可能的作用机制，从而为ALI的治疗提供新的策略。 方法：将84只SD雄性大鼠随机分为4组，每组21只。生理盐水对照组（N组）：舌下静脉注射0.25ml生理盐水，2小时后经尾静脉注射0.25ml生理盐水；hAMSCs对照组（NH组）：舌下静脉注射0.25ml生理盐水，2小时后经尾静脉注射使用4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐（4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）标记的hAMSCs250μl（1×104/μl）；急性肺损伤组（ALI组）：舌下静脉注射LPS（4mg/kg）造模，2小时后经尾静脉注射0.25ml生理盐水；hAMSCs干预组（LH组）：舌下静脉注射LPS（4mg/kg）造模，2小时后经尾静脉注射使用DAPI标记的hAMSCs250μl（1×104/μl）。每组分为6小时、12小时、72小时3个亚组并每个亚组随机处死7只大鼠。在荧光显微镜下观察NH组及LH组hAMSCs在肺组织中的定植情况；应用酶联免疫吸附实验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）检测方法对测84只大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid,BALF）中白细胞介素1（Interleukin1,IL-1）、IL-10、肿瘤坏死子α（tumornecrosisfactorα,TNF-α）的含量变化；采用热干燥法测肺组织湿干重比值（W/D），HE染色镜下观察各组大鼠肺组织病理形态，使用免疫组织化学法（Immunohistochemistry,IHC）测定ENaC各亚基（ENaCα、ENaCβ、ENaCγ）的表达；免疫印迹试验（Westernblot）检测每组大鼠肺组织ENaC各亚基（ENaCα、ENaCβ、ENaCγ）的表达量。 结果：NH及LH组，在荧光显微镜下可观察到在肺泡周围有蓝色荧光标记的hAMSCs，其中以LH组定植较多，NH组定植较少，说明hAMSCs能定向“归巢”至受损肺组织。N组与NH组相比较，各组6、12、72小时肺组织病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量变化、ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达无明显差异（P＞0.05）；ALI组、LH组各时点大鼠肺组织病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量均增高，ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达下调，两两之间相比较其差异均有统计学意义（P＜0.05）；ALI组与LH组同一时间点相比较，LH组大鼠肺组织炎症浸润病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量均下降，ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达均上调（P＜0.05）。在ALI组中，与6小时组相比较，12小时组大鼠肺组织炎症浸润病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量、ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达均无明显差异（P＞0.05）；72小时组大鼠肺组织炎症浸润病理评分下降、W/D下降、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量降低，ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达上调（P＜0.05）。在LH组中，与6小时组相比较，12小时组大鼠肺组织炎症浸润病理评分、W/D、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量、ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达均无明显差异（P＞0.05）；72小时组大鼠肺组织炎症浸润病理评分下降、W/D下降、BALF细胞因子IL-1、IL-10、TNF-α含量降低，ENaCα、ENaCβ、ENaCγ蛋白表达上调（P＜0.05）。 结论：外源性hAMSCs静脉移植可以定向“归巢”至大鼠肺组织内，且以ALI大鼠明显。hAMSCs干预可以抑制IL-1、TNF-α、IL-10的释放；并且hAMSCs干预可以上调ENaCα、ENaCβ、ENaCγ的表达，加强肺泡液体的清除，降低肺组织的损伤。
NETL