摘要
背景与目的 假肥大性肌营养不良症是最常见的X连锁隐性遗传性肌肉病，包括杜氏肌营养不良症(Duchennemusculardystrophy，DMD)和贝氏肌营养不良症(Beckermusculardystrophy，BMD)，影响1/3600～1/6000的活男胎。DMD患儿发病时间多在2到5岁之间，出现进行性肌肉萎缩，运动能力逐渐丧失，然后在12岁左右丧失行走能力，最终死于心、肺功能衰竭。BMD患儿与DMD患儿的临床症状相似，但发病时间较晚，病程进展缓慢，通常不影响正常寿命，但会严重影响患者生活质量。目前尚没有效的临床治疗方法，基因治疗是最有前景能治愈的方法，精准的基因诊断和产前诊断技术是早发现，早预防，早治疗的重要途径。 本研究拟通过联合应用MLPA、NGS（高通量测序）、Sanger测序、荧光定量PCR技术等方法进行基因诊断，应用STR连锁分析的方法进行产前诊断，并通过两种方式相互验证，分析DMD的基因突变谱、新发突变率、遗传率，本研究所分析的数据对该病的基因治疗起到积极作用。 材料及方法 1.本课题选取2005年1月1日至2019年8月31日间在郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心就诊的2042个无亲缘关系的已经经过临床和基因诊断确诊的DMD/BMD家系。 2.对家系先证者进行MLPA分析，确定其缺失或重复的位点。 3.对于MLPA结果阴性的患者，应用NGS进行DMD基因79个外显子的检测，对于发现的突变位点再用Sanger测序进行验证。 4.对于家系中需要进行产前诊断的孕妇，通过抽取孕妇的胎儿绒毛或胎儿羊水，应用STR连锁分析的方法对胎儿进行分子诊断，若是健康儿则出生后抽取其外周血进行验证;若是选择流产的患儿，则收集流产物进行验证。 结果 1.结合应用MLPA、NGS及Sanger测序对2042个中国汉族DMD/BMD家系先证者进行遗传学分析，其中，1986例家系检出突变，56个家系未检出变异，检出率为97.26％(1986/2042)。DMD和BMD分别占78.60％和21.40％，其中包括33名女性先证者。大片段缺失、重复和小突变分别占71.85％、8.76％和19.39％。其中，最常见的外显子缺失和重复类型分别是E45-50缺失和E2重复，在小突变中未发现热点。本研究检验了1595个家庭的DMD家族史，58.62％(935/1595)遗传自其母亲，新发突变率为41.38％(660/1595)。在本研究中，可以通过已有的基因治疗方法缓解症状的患者比例为34.28％(700/2042)。 2.应用连锁分析对家系中的872个孕妇行产前诊断931次（1次妊娠双胎算2次），其中，20.73％(193/931)为男性患胎，16.33％(152/931)为女性携带者，37.59％(350/931)为正常男胎，25.35％(236/931)为正常女胎。 3.对新生儿或流产物进行基因诊断，经验证结果均匹配。 结论 本研究联合应用MLPA、NGS及Sanger测序为DMD家系进行基因分析，可以对DMD家系进行明确的诊断。由于DMD的新发突变率（denovo）高达41.38％、病死率高、预后不良且至今尚无有效治愈方法，产前诊断和遗传咨询应给予高度重视。在产前诊断及遗传咨询中，即使无DMD生育史或家族史的家庭仍需要重视该病的可能发病风险，开展DMD的无创产前诊断服务，进行新生儿筛查，扩大DMD产前筛查范畴，防止DMD新发突变患儿的出生是十分重要的。
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