摘要
目的： 观察健脾通络饮含药血清对人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）缺氧损伤后的保护作用，探讨健脾通络饮含药血清对B细胞淋巴瘤（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达的影响，研究健脾通络饮含药血清可以通过促进Bcl-2蛋白表达、抑制Bax和Caspase-3蛋白的表达，促进SH-SY5Y细胞的增殖和分化，发挥神经保护作用的机制，为临床治疗脑卒中提供理论依据。 方法： 30只健康雄性Wistar大鼠适应性喂养一周后，灌胃给药，制作健脾通络饮含药血清和银杏叶片含药血清，将SH-SY5Y细胞放置在DEME培养基中培养并传代，当细胞密度达90%以上后，将神经细胞放入缺氧培养箱中，建立SH-SY5Y缺氧复氧模型，取一部分模型细胞，通过MTT检测法选择出健脾通络饮含药血清低、中、高浓度；将剩余的模型细胞随机分成6组：命名为正常对照组（C）、缺氧复氧模型组（IR）、健脾通络饮含药血清低浓度组（JL）、健脾通络饮含药血清中浓度组（JM）、健脾通络饮含药血清高浓度组（JH）、银杏叶片阳性对照组（GC）。在缺氧复氧SH-SY5Y细胞培养24小时后，采用Hoechst染色法检验神经细胞凋亡数量；流式细胞检测神经细胞凋亡率；Western blot法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白含量；采用SPSS26.0统计软件进行数据处理。 结果： 1.健脾通络饮含药血清对SH-SY5Y细胞增殖率的影响：培养24h，不同体积百分比的健脾通络饮含药血清与空白对照相比，OD值差异均有统计学意义（Plt;0.01），最终，将10%、15%、20%的含药血清百分比作为健脾通络饮含药血清低、中、高浓度组中含药血清的浓度。 2.Hoechst染色结果显示：给予中、高浓度的健脾通络饮含药血清处理的组别与缺氧复氧损伤处理的模型组相比SH-SY5Y凋亡数量明显减少。 3.流式细胞检测结果显示：与缺氧复氧模型组相比，中、高浓度的健脾通络饮含药血清和银杏叶片阳性对照组中，细胞凋亡率下降，差异有统计学意义（Plt;0.05）。 4.Western blot结果显示：在健脾通络饮含药血清的干预下，与正常对照组相比，缺氧复氧模型组中Bax蛋白表达升高，Bcl-2蛋白表达略微增多，但Bcl-2/Bax比值明显下降（Plt;0.05），Caspase-3蛋白数量上升，健脾通络饮含药血清中、高浓度组与缺氧复氧模型组相比，Bcl-2蛋白表达量升高，Bax下降，两者比值明显升高（Plt;0.05），Caspase-3蛋白表达减少（Plt;0.05）。 结论： 1.健脾通络饮含药血清可增殖缺氧复氧的SH-SY5Y损伤细胞，且含药血清体积分数在0-20%之间时，细胞增殖率依次递增。 2.其保护机制与其下调促凋亡蛋白和增加抑凋亡蛋白的表达有关。
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