摘要
目的： 白山毛桃根是畲医药用来治疗消化道肿瘤等疾病最有代表性药物之一。本研究通过对白山毛桃根化学成分的系统分析，结合血清药物化学和药代动力学的方法，逐步筛选和明确白山毛桃根关键药效成分(质量标志物)；同时通过白山毛桃根治疗胃癌的网络药理学和分子对接研究，初步阐明了白山毛桃根多组分、多靶点协同的作用机制。 方法： 白山毛桃根化学成分鉴别：采用UPLC-QTOF-MS对白山毛桃根水煎液中的成分进行全面鉴定，将正负离子模式下测定的数据导入MassLynx4.1版软件进行分析。首先，根据母体离子的高分辨一级质量数推断元素组成和分子式。然后对总离子流图进行处理，得到二级质谱的碎片离子信息。通过查阅文献和相关数据库，获取相关成分的裂解特征和规律。基于上述信息，初步推测分子结构。对于有参考标准品的化学成分鉴定，若母离子的准确质量，次级质谱的碎片离子信息以及组分的保留时间与参考标准品的相应信息相一致，则可明确鉴定其结构。对于白山毛桃根中尚未发现的化合物，可参考先前已鉴定的同属不同种植物的化学成分的母离子的准确质量和次级质谱的碎片离子信息推测化合物结构。 白山毛桃根主要成分含量测定：采用UPLC-MS/MS正负离子切换模式，以0.1%甲酸水-乙腈溶液为流动相梯度洗脱进行多反应监测定量检测。建立白山毛桃根水煎液13种成分含量测定方法。 白山毛桃根在大鼠血浆和尿液代谢研究：将SD大鼠灌胃白山毛桃根水煎液后，血浆和尿液经甲醇沉淀蛋白处理后，UPLC-QTOF-MS采集数据，将其导入MassLynx4.1版软件，获得母离子的准确分子量，将文献中查到的相关裂解规律与图谱中特征碎片离子进行比对和分析，进而初步鉴定血浆和尿液中成分及代谢物。 白山毛桃根的药代动力学研究：白山毛桃根水煎液单次灌胃给药后，在预设的时间点尾静脉采血，UPLC-MS/MS方法测定不同时间点大鼠体内原型成分的血药浓度，应用DAS3.0软件计算主要药动学参数。 白山毛桃根网络药理学研究：使用ACD/Labs2015Release软件预测吸收入血成分的ADME值来筛选成药性活性成分，同时从STITCH数据库收集上述成分靶点。从OMIM，MalaCards，TTD数据库收集胃癌的靶点。通过映射获得共同靶点，并构建共同靶点的PPI网络，进行GO通路和KEGG通路富集分析。最后，成药性成分与共同靶点进行分子对接，若最低结合能小于-5.0Kj/mol，则认为它们存在相互作用，以此筛选潜在的药效成分。 结果： 通过对白山毛桃根水煎液中MS2断裂特征和色谱保留行为的分析，初步推测白山毛桃根中的199种化学成分，主要含有五环三萜类、黄酮类、香豆素类、酚酸类等化合物，并测定了其中13种成分的含量，为白山毛桃根的质量标志物研究提供了参考。 从血浆和尿液样本中初步鉴定出58种原型成分和227种相关代谢产物。大多数代谢产物都是通过羟基化，甲基化，乙酰化，脱羰基，脱甲基和葡糖醛酸化等代谢途径产生的。 白山毛桃根水煎液的药代动力学研究结果显示在给大鼠灌药之后，丁香酸、阿魏酸和玉米素3种分析物的Tmax分别为1.0±0.5，0.7±0.3，1.8±1.4h，表明了分析物在血浆中能迅速被吸收。3种分析物的T1/2分别为53.3±21.1，36.4±32.8，49.2±18.2h，表明分析物在大鼠血浆中的消除速率较慢。 网络药理学研究得到8个共同靶点。KEGG通路富集结果显示，FoxO信号通路、胃癌通路、癌症中的蛋白聚糖、细胞衰老通路等是白山毛桃根治疗胃癌的主要通路。CCND1、TGFB1、MAPK1、MAPK3均参与调节了以上四条通路。分子对接结果显示，MPO与伞形花内酯、原儿茶酸，CCND1与伞形花内酯的最低结合能均小于-5.0kcal/mol。暗示这些成分可能是白山毛桃根的主要抗肿瘤成分。 结论： 根据整合体内外化学物质组、药代动力学、分子对接及网络药理学的方法分子对接及网络药理学的结果，我们推测伞形花内酯、丁香酸等可能是白山毛桃根的质量标志物。同时本研究也表明多种方法的整合是中药药效成分和质量标志物发现的重要而有效策略。
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