摘要
目的：通过白芨多糖水凝胶作用于糖尿病小鼠创面，观察创面的愈合效果，为可用于临床的敷料开发提供科学基础，为糖尿病创面的治疗方法提供新思路。 方法：以白芨多糖（BSP）、卡波姆940（CBM940）、羧甲基壳聚糖（CMC）作为水凝胶原料，交联成白芨多糖水凝胶（CCHG/BSP）。（一）、使用扫描电子显微镜、流变仪、保水实验对该水凝胶进行表征，通过溶血实验，对于该水凝胶进行安全性检测。（二）、用小鼠L929成纤维细胞作为体外实验的细胞模型，使用MTT法检测该水凝胶对于细胞增殖；使用划痕实验法检测该水凝胶对于细胞迁移的作用。（三）、准备48只SPF级雄性ICR小鼠（6~8周，体重18~24g），随机分成4组，每组12只小鼠，适应性喂养1周后，按照150mg/kg剂量，腹腔注射1%链脲佐菌素（STZ）溶液诱导糖尿病。在造模成功的小鼠背部两侧分别制作直径8mm的圆形创面，每只小鼠2个创面，外缝硅胶环后，分别予以生理盐水（NS）、单纯水凝胶（CCHG）、白芨多糖水溶液（BSP）、白芨多糖水凝胶（CCHG/BSP）治疗，每天观察其愈合情况，拍照记录。分别于第3、7、14、21天取创周组织对其进行组织学分析及细胞因子检测，观察皮肤细胞病理及相关因子的改变。取各组治疗后21天小鼠的主要内脏器官，行HE染色观察其结构及炎症细胞改变情况，再次检验材料的安全性。 结果：成功制备白芨多糖水凝胶后，对其进行表征显示，该水凝胶具有疏松多孔的结构、良好的力学性能和良好的保水性。溶血实验显示，该水凝胶具有良好的安全性。细胞实验显示，该水凝胶可以有效地促进小鼠L929成纤维细胞的增殖和迁移。在体内实验中，随着时间的推移，每组小鼠的背部伤口均趋于愈合。其中，NS治疗组愈合速度最慢，CCHG/BSP组愈合速度最快，优于CCHG和BSP治疗组。HE染色显示，CCHG/BSP组炎性细胞数量降低较快，愈合质量更好，有皮肤附属器出现。Masson染色显示，CCHG/BSP治疗组胶原生成明显优于其他三组，胶原排列更加有序，没有出现胶原的过度沉积。在CD31免疫组化的研究中，CCHG/BSP治疗组中CD31表达量高于其他三组，有显著的统计学差异。在Ki67的检测中，CCHG/BSP治疗组早期即出现细胞增殖的高峰，早于NS治疗组。酶联免疫吸附试验显示，CCHG/BSP治疗组的TNF-α、IL-6表达量上升较早、较快，而后逐渐回落，没有出现炎症的高峰，明显区别于NS组。在CCHG/BSP组中，在早期TGF-β1就出现较高表达，而后逐步继续升高，至愈合晚期又稍有回落，这更有利于创面的愈合，提高愈合质量。内脏器官HE染色显示，各组材料均有良好的安全性。 结论：采用白芨多糖与卡波姆940、羧甲基壳聚糖配伍制成白芨多糖水凝胶，其具有良好的安全性，能发挥白芨多糖调节炎症、促进血管新生的作用，且水凝胶具有丰富的孔隙和良好保湿能力，能模拟细胞外基质的结构和功能，促进细胞迁移和增殖，有效促进小鼠糖尿病创面的修复。其作用机制可能是通过促进新生血管形成、调节炎症、推进上皮化进程，达到促进小鼠糖尿病创面愈合的疗效，具体机制仍需进一步探究。本课题为白芨多糖新药产品的研发及其水凝胶敷料在临床的应用奠定了一定的科学基础，为糖尿病创面的治疗方法提供了新思路。
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