摘要
第一部分蒸馏水对人晶状体上皮细胞的活性影响及清除作用 目的：探讨蒸馏水（DW）引起年龄相关性白内障患者离体前囊膜晶状体上皮细胞（LECs）死亡的有效及最佳作用时间。探讨DW联合冲洗清除LECs的有效及最佳作用时间。观察并分析DW处理后LECs的组织病理学变化。 方法：收集白内障手术取出的156片晶状体前囊膜，分别等分为312小片。157小片用于细胞活性研究，随机分为4组：阴性对照组、阳性对照组、平衡盐溶液（BSS）组和DW组（BSS或DW分别浸泡囊膜1、2或3分钟），分析各组细胞活性指标差异。125小片囊膜随机分为2组：BSS联合冲洗组和DW联合冲洗组（BSS或DW分别浸泡囊膜1、2或3分钟后，70cm瓶高处BSS冲洗囊膜1分钟），分析各组LECs脱落百分比差异。各取15小片囊膜分别行苏木素-伊红（HE）染色及透射电子显微镜（TEM）检查，分析DW处理后的组织病理学变化。 结果：（1）DW对LECs活性的影响：DW2、3分钟组较阴性对照组LECs密度降低，LECs死亡数和死亡率增加有统计学差异。作用时间相同时，DW与BSS相比LECs死亡数和死亡率增加有统计学差异。DW3分钟组引起LECs死亡数和死亡率增加的作用最显著。 （2）DW对LECs的清除作用：DW联合或不联合冲洗各处理组较阴性对照组LECs脱落百分比增加有统计学差异。作用时间相同时，DW联合冲洗较单用DW处理LECs脱落百分比增加有统计学差异。DW3分钟联合冲洗组引起LECs脱落百分比增加的作用最显著。 （3）DW对LECs显微结构的影响：HE染色结果示DW1、2、3分钟组细胞破坏，DW2、3分钟组LECs部分脱落。 （4）DW对LECs超微结构的影响：TEM结果示DW1、2、3分钟组细胞溶解破坏，细胞器肿胀，细胞间连接破坏；DW1、2分钟组细胞与囊膜连接疏松，DW3分钟组细胞与囊膜部分分离。 结论：（1）DW处理人眼离体前囊膜LECs2或3分钟均可明显降低细胞活性，导致LECs死亡；DW3分钟引起LECs死亡的作用最显著。 （2）DW1、2或3分钟联合BSS冲洗均可有效清除人眼离体前囊膜LECs；DW3分钟联合冲洗清除LECs的作用最显著。 （3）DW处理后LECs的组织病理学变化提示LECs坏死。 第二部分蒸馏水对人晶状体上皮细胞作用的分子机制 目的：研究蒸馏水（DW）能否诱导LECs凋亡，及引起凋亡的有效及最佳作用时间。研究DW引起LECs凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase3和Cleavedcaspase9水平变化的有效及最佳作用时间。 方法：选取人晶状体上皮细胞（LECs）SRA01/04细胞系，分为4组：阴性对照组、阳性对照组、平衡盐溶液（BSS）组和DW组（BSS或DW分别处理SRA01/04细胞30秒，1、2或3分钟后继续培养24小时）。通过流式细胞术检测细胞是否凋亡，分析各组细胞凋亡率差异；通过蛋白质印迹法检测细胞Bax、Bcl-2，Cleavedcaspase3和Cleavedcaspase9蛋白水平变化，比较各组凋亡蛋白水平差异。 结果：（1）流式细胞术：DW2和3分钟组较阴性对照组SRA01/04细胞总凋亡率和晚期凋亡率增加有统计学差异；DW3分钟组较阴性对照组细胞早期凋亡率增加有统计学差异。作用时间为2或3分钟时，DW较BSS细胞总凋亡率及晚期凋亡率增加有统计学差异。DW3分钟组引起细胞凋亡率增加的作用最显著。 （2）蛋白质印迹法：DW2和3分钟组较阴性对照组Bax、Cleavedcaspase3和Cleavedcaspase9蛋白水平增加，Bcl-2蛋白水平降低有统计学差异。作用时间为1、2或3分钟时，DW较BSSBax、Cleavedcaspase3和Cleavedcaspase9蛋白水平增加，Bcl-2蛋白水平降低有统计学差异。DW3分钟组引起细胞凋亡蛋白水平变化的作用最显著。 结论：（1）DW处理2或3分钟可引起LECs凋亡，且主要引起细胞晚期凋亡。DW3分钟引起LECs凋亡的作用最显著。 （2）DW处理2或3分钟可引起Bax、Cleavedcaspase3和Cleavedcaspase9蛋白水平增加，Bcl-2蛋白水平降低，导致LECs凋亡。DW3分钟组凋亡相关蛋白水平变化最显著。
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