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GPR35基因调控PI3K/AKt/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖的研究
李红娜1
作者信息
摘要
目的：从分子学探讨G蛋白偶联受体35（GProtein-CoupledReceptor35，GPR35）调控磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响，以及GPR35基因上调引起肿瘤坏死因子受体相关蛋白1蛋白表达变化对乳腺癌发病机制的研究。方法：首先培养乳腺癌细胞（MDA-MB-231），采用基因修饰方法构建研究所用的过表达GPR35细胞模型，采用Westernblot和免疫荧光检测乳腺癌细胞中GPR35的表达；采用MTT方法检测过表达GPR35后乳腺癌细胞增殖率的变化。采用qPCR方法检测过表达GPR35后乳腺癌细胞中PI3K、AKt1、AKt3、mTOR、TRAP1mRNA的表达水平；采用Westernblot验证基因的表达，检测调控信号通路蛋白PI3K、总AKt、总mTOR的表达以及TRAP1蛋白的表达，进一步检测过表达GPR35后乳腺癌细胞中p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白的表达水平。结果：Westernblot方法检测乳腺癌细胞中过表达GPR35a组和过表达GPR35b组中GPR35蛋白的表达水平均高于正常组（plt;0.05），其中过表达GPR35b组GPR35蛋白的表达水平高于过表达GPR35a组（plt;0.05）；细胞免疫荧光染色实验方法确定GPR35主要定位于胞浆中，与正常组作对比，过表达GPR35a组和过表达GPR35b组乳腺癌细胞中GPR35蛋白（绿色）的表达明显增加；MTT方法检测乳腺癌细胞增殖实验表明，过表达GPR35a组和过表达GPR35b组乳腺癌细胞的增殖率明显高于正常组（plt;0.05），其中过表达GPR35b组乳腺癌细胞的增殖率高于过表达GPR35a组（plt;0.05）；qPCR实验检测乳腺癌细胞中PI3K、AKt1、AKt3、mTOR基因的表达水平，正常组、过表达GPR35a组和过表达GPR35b组三组间两两比较均无明显变化（pgt;0.05）；qPCR实验检测乳腺癌细胞中TRAP1mRNA的表达水平，过表达GPR35a组和过表达GPR35b组TRAP1mRNA的表达水平均高于正常组（plt;0.05），其中过表达GPR35a组TRAP1mRNA的表达水平高于过表达GPR35b组（plt;0.05）；Westernblot方法检测乳腺癌细胞中PI3K、总AKt、总mTOR蛋白的表达水平，正常组、过表达GPR35a组和过表达GPR35b组三组间两两比较均无明显变化（pgt;0.05），与基因表达水平一致；而过表达GPR35a组和过表达GPR35b组p-PI3K、p-AKt、p-mTOR、TRAP1蛋白的表达水平均高于正常组（plt;0.05），并且过表达GPR35b组p-PI3K、p-AKt、p-mTOR、TRAP1蛋白的表达水平均高于过表达GPR35a组（plt;0.05）。结论：（1）GPR35过表达能促进乳腺癌细胞（MDA-MB-231）的增殖，与乳腺癌的发生、发展密切相关。（2）GPR35通过磷酸化激活PI3K/AKt/mTOR信号通路，上调TRAP1mRNA和蛋白表达，促进乳腺癌细胞的增殖。
关键词
乳腺癌/MDA-MB-231/PI3K/AKt/mTOR信号通路/TRAP1/G蛋白偶联受体35引用本文复制引用
授予学位
硕士学科专业
人体解剖与组织胚胎学导师
欧叶涛学位年度
2021学位授予单位
桂林医学院语种
中文中图分类号
R73