摘要
目的研究miR-1293在非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC）细胞株A549与顺铂耐药细胞株A549/DDP中的表达差异，及其在非小细胞肺癌顺铂耐药过程中的作用和分子机制。 方法顺铂诱导建立肺癌耐药细胞株——A549/DDP细胞，MTT法检测细胞IC50，计算耐药指数。采用脂质体法将miR-1293抑制物（miR-1293inhibitor）和阴性对照RNA（miR-NC）分别转染A549和A549/DDP。流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告基因实验检测miR-1293能否调控RUNX3；qPCR检测miR-1293和RUNX3的mRNA表达；蛋白免疫印迹检测MDR1/ABCB1、MRP1/ABCC1、Bcl-2、RUNX3、Akt1和p-Akt蛋白表达。 结果A549/DDP细胞株建立，其对顺铂的耐药指数为7.23。miR-1293在耐药细胞株A549/DDP中的表达水平（3.89±0.08）显著高于其在A549（1.01±0.05）中的表达水平；RUNX3mRNA和蛋白在耐药细胞株A549/DDP的表达与A549相比显著降低（tmRNA=7.74，Plt;0.05；t蛋白=20.04，Plt;0.01）。与miR-NC组相比，miR-1293inhibitor组的IC50值显著降低（t=94.49，Plt;0.05）。miR-1293inhibitor组MDR1/ABCB1、MRP1/ABCC1蛋白表达水平显著低于miR-NC组（tMDR1/ABCB1=10.61，Plt;0.05；tMRP1/ABCC1=39.57，Plt;0.05）。同时，miR-1293inhibitor组细胞凋亡水平显著高于miR-NC组（t=7.15，Plt;0.05）。促凋亡蛋白Bax在miR-1293inhibitor组表达升高（t=33.63，Plt;0.05）；凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低（t=11.62，Plt;0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示，野生型RUNX33’UTR+miR-1293组的荧光素酶活性显著低于其余各组，而突变型RUNX33’UTR+miR-1293组的荧光素酶活性与对照组无显著差异。蛋白免疫印结果显示miR-1293inhibitor组RUNX3蛋白表达高于miR-NC组（t=17.75，Plt;0.05）；Akt和p-Akt表达水平显著低于miR-NC组（tAkt=67.55，Plt;0.05；tp-Akt=16.98，Plt;0.05）。 结论miR-1293促进非小细胞肺癌顺铂耐药过程，其机制是：miR-1293靶向调控RUNX3，激活Akt信号通路，抑制A549细胞凋亡，从而促进A549/DDP细胞耐药性。
NETL