摘要
目的磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的正常激活对于维持 完整的足细胞结构和功能来说非常重要。瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6），是属于众多足细胞裂隙膜蛋白（SD）的其中一个;然而二者在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的足细胞损伤的过程当中的作用机制尚不明确。在本研究中，我们对PI3K/Akt信号通路与TRPC6通道在AngⅡ诱导的足细胞损伤过程当中的相互作用进行探讨。 方法（1）体外培养小鼠肾小球足细胞：使用加入了1%青霉素-链霉素和10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基，培养条件为37℃，5%CO2,当中每间隔24小时更换一次培养基，当细胞密度达80%左右时进行传代。（2）实验分组:根据研究目的将细胞分为8组：①对照组、②血管紧张素Ⅱ组（10-6mol/L）、③血管紧张素Ⅱ（10-6mol/L）+氯沙坦（10-6mol/L）组、④氯沙坦组（10-6mol/L）、⑤血管紧张素Ⅱ（10-6mol/L）+LY294002（10-5mol/L）组、⑥LY294002组（10-5mol/L）、⑦血管紧张素Ⅱ（10-6mol/L）+SKF96365（4×10-5mol/L）组、⑧SKF96365（4×10-5mol/L）组。（3）采用qRT-PCR法和WesternBlot检测MPC5细胞中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）的mRNA和蛋白表达水平。（4）采用Hoechst33258染色法检测足细胞凋亡情况。 结果（1）与对照组比较，血管紧张素Ⅱ组足细胞TRPC6的表达显著升高，Akt的表达无统计学差异，p-Akt显著降低,足细胞凋亡显著增加。（2）与血管紧张素Ⅱ组相比，SKF96365干预后，TRPC6的表达显著下降，Akt的表达无统计学差异，p-Akt表达显著增加，足细胞凋亡显著减少。（3）与血管紧张素Ⅱ组相比，LY294002干预后，TRPC6的表达无改变，Akt的磷酸化水平显著减少，足细胞凋亡显著增加。（4）与血管紧张素Ⅱ组相比，氯沙坦干预后，Akt的表达无统计学差异，p-Akt表达显著增加，TRPC6的表达显著下降，足细胞凋亡显著减少。结论AngⅡ可通过激活TRPC6通道导致足细胞损伤，该损伤过程可能是进一步抑制了PI3K/Akt通路的激活而导致的。阻断TRPC6通道的活化，有助于PI3K/Akt信号通路的激活，进而减少足细胞凋亡。
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