摘要
研究背景：RCE-4是从百合科铃兰族吉祥草属植物吉祥草(Reineckiacarnea(Andr.)Kunth)中提取分离的一类甾体皂苷类单体化合物，已作为吉祥草的标志性成分在湖北省地方中药材标准中被收录。目前研究表明，RCE-4具有抗宫颈癌作用，可抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡，但作用机制尚不完全明确。 目的：研究吉祥草活性成分RCE-4对人宫颈癌CaSki细胞的增殖抑制作用，并探索RCE-4对CaSki细胞内质网应激和细胞周期阻滞的影响及其分子作用机制，为RCE-4将来的临床应用提供理论依据。 方法：(1)四甲基偶氮唑蓝法（MTT法）考察不同浓度的RCE-4分别作用24h、48h、72h对CaSki细胞生长的影响，并分别计算其半抑制浓度（IC50）；(2)克隆形成实验检测RCE-4对CaSki细胞的增殖抑制作用；(3)流式细胞术检测RCE-4作用后CaSki细胞细胞周期的变化；(4)westernblot检测内质网应激（endoplasmicreticulumstress，ERS）及细胞周期阻滞相关信号通路及调控蛋白的表达。 结果：(1)RCE-4对人宫颈癌CaSki细胞的增殖具有显著的抑制作用，其作用24h、48h、72h的IC50值分别为8.61、4.69、4.34μmol·L-1。(2)克隆形成实验结果显示，与对照组相比，经8、12、16μmol·L-1RCE-4处理后的CaSki细胞集落形成数目明显减少。(3)流式细胞术结果显示，RCE-4处理CaSki细胞24h后可将其细胞周期阻滞在G2/M期。(4)Westernblot结果显示CaSki细胞中内质网相关经典分子PERK、ATF-4、CHOP和p-eIF2α的蛋白表达水平及细胞周期相关调控分子p21、p27、ATM、CyclinE1蛋白水平显著升高；CDK1、cdc25C、p-cdc25C、CyclinB1、CyclinD1、Chk2、p-Chk2、GADD45α、MDM2蛋白水平显著降低，表明RCE-4通过激活PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路触发了内质网应激，通过抑制ATM/Chk2/cdc25C信号通路以及CyclinB1、CDK1的表达将CaSki细胞周期阻滞于G2/M期，p21、p27、GADD45α、MDM2等分子参与了该过程。 结论：RCE-4可能通过触发内质网应激诱导CaSki细胞G2/M期阻滞从而抑制人宫颈癌CaSki细胞增殖。
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