摘要
目的：本研究通过菖蒲郁金汤作用于幼龄TS模型大鼠，观察干预后不同时间点大鼠抽动发作情况及突触体形态学改变，探究菖蒲郁金汤对TS模型大鼠突触体及突触前膜调控蛋白Munc13-1、Munc18-1是否具有改善作用，并研究其抗抽动作用机制。 方法：选取240只3周龄SPF级SD雄性大鼠，质量(60±10)g,在实验开始之前适应性喂养1周，利用随机数字表法将240只大鼠随机选取60只作为空白对照组，其余180只用于TS模型制备，待模型制备成功后，再随机将造模成功的大鼠随机分为中药组（菖蒲郁金汤组），西药组（盐酸硫必利组），模型组，每组各60只。中药组给予菖蒲郁金汤15ml/(kg.d)灌胃，西药组给予盐酸硫必利(3.194mg/ml)灌胃，并分别在造模完成后0d、7d、14d、21d、28d后每组12只大鼠，取纹状体进行实验检测。 结果： 1.TS大鼠刻板行为、运动行为学：在0d下，模型组、中药组、西药组都出现刻板行为、运动行为，但组间比较，刻板行为评分、运动行为评分均无统计学差异（P＞0.05）。在7d、14d、21d、28d下，与模型组比较，西药组刻板行为、运动行为评分均可明显降低，有统计学差异（均P＜0.01），与模型组比较，中药组刻板行为、运动行为评分均可明显降低，有统计学差异（均P＜0.01）。与西药组比较，中药组刻板行为、运动行为评分随着用药时间的延长，二者无统计学差异（P＞0.05）。 2.HE结果： 正常组：SD大鼠纹状体染色均匀，神经细胞排列整齐，胶质细胞分散均匀。 模型组：与正常组比较，神经细胞显著减少，胶质细胞排列杂乱。 药物组：与模型组比较，药物组细胞整体排列较整齐。 3.电镜结果：由透射电镜图片可以看出，正常组可见明显的突触小体结构，突触前膨大处含有大量的突触小泡，突触间隙清晰可见，前后膜分别位于突触侧和树突侧，间隙处电子密度较低而透亮;模型组与正常组相比较，0d和7d突触小泡数量明显减少，前后膜相距较近，突触间隙模糊不清，从14d往后，随着时间的延长，相对于正常组，突触间隙明显增大;与模型组相比较，药物干预组随着给药时间的延长，突触小泡数量明显增加，突触间隙增大的情况显著改善，西药组的治疗效果在短时间内明显优于中药组，随着给药时间的延长，中药与西药的干预效果基本相当。 4.ICH、WB、RT-PCR三种检测方法检测结果： Munc13-1： 在0d下，与正常组大鼠纹状体中突触体Munc13-1蛋白表达量相比，模型组中Munc13-1蛋白表达量显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，西药组和中药组中Munc13-1蛋白表达量无统计学差异（P＞0.05）。在7d、14d、21d、28d下，与正常组比较，模型组大鼠Munc13-1蛋白表达量均显著升高（均P＜0.01），与模型组相比，西药组和中药组大鼠Munc13-1蛋白表达量均显著降低（均P＜0.01）；本研究进一步对同一干预组在不同时间点下大鼠Munc13-1蛋白表达量变化进行研究，结果发现正常组和模型组大鼠Munc13-1蛋白表达量均随干预时间的增加无显著变化（P＞0.05）；西药组和中药组大鼠Munc13-1蛋白表达量均随干预时间的增加逐渐降低，经统计后，与0d相比较，西药组和中药组大鼠在干预7d、14d、21d、28d后，二者Munc13-1蛋白表达量变化均具有显著性差异（P＜0.01）。 Munc18-1: 在0d下，与正常组大鼠纹状体中突触体Munc18-1蛋白表达量相比，模型组中Munc18-1蛋白表达量显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，西药组和中药组中Munc18-1蛋白表达量无统计学差异（P＞0.05）。在7d、14d、21d、28d下，与正常组比较，模型组大鼠Munc18-1蛋白表达量均显著升高（均P＜0.01），与模型组相比，西药组和中药组大鼠Munc18-1蛋白表达量均显著降低（均P＜0.01）；本研究进一步对同一干预组在不同时间点下大鼠Munc18-1蛋白表达量变化进行研究，结果发现正常组和模型组大鼠Munc18-1蛋白表达量均随干预时间的增加无显著变化（P＞0.05）；西药组和中药组大鼠Munc18-1蛋白表达量均随干预时间的增加逐渐降低，经统计后，与0d相比较，西药组和中药组大鼠在干预7d、14d、21d、28d后，二者Munc18-1蛋白表达量变化均具有显著性差异（P＜0.01）。 5.ELISA结果： HVA： 在0d下，与正常组大鼠纹状体中HVA表达量相比，模型组中HVA表达量显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，西药组和中药组中HVA表达量无统计学差异（P＞0.05）。在7d、14d、21d、28d下，与正常组比较，模型组大鼠HVA表达量均显著降低（均P＜0.01），与模型组相比，西药组和中药组大鼠HVA表达量均显著升高（均P＜0.01）；本研究进一步对同一干预组在不同时间点下大鼠HVA表达量变化进行研究，结果发现正常组和模型组大鼠HVA表达量均随干预时间的增加无显著变化（P＞0.05）；西药组和中药组大鼠HVA表达量均随干预时间的延长逐渐升高，经统计后，与0d相比较，西药组和中药组大鼠在干预7d、14d、21d、28d后，二者HVA表达量变化均具有显著性差异（P＜0.01）。 DA: 在0d下，与正常组大鼠纹状体中DA表达量相比，模型组中DA表达量显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，西药组和中药组中DA表达量无统计学差异（P＞0.05）。在7d、14d、21d、28d下，与正常组比较，模型组大鼠DA表达量均显著降低（均P＜0.01），与模型组相比，西药组和中药组大鼠DA表达量均显著升高（均P＜0.01）；本研究进一步对同一干预组在不同时间点下大鼠DA表达量变化进行研究，结果发现正常组和模型组大鼠DA表达量均随干预时间的延长无显著变化（P＞0.05）；西药组和中药组大鼠DA表达量均随干预时间的延长总体升高，经统计后，与0d相比较，西药组和中药组大鼠在干预7d、14d、21d、28d后，二者DA表达量变化均具有显著性差异（P＜0.01）。 结论： 1.模型大鼠突触体形态结构发生明显改变。 2.盐酸硫必利、菖蒲郁金汤均可对亚氨基二丙腈致TS模型大鼠的抽动有明显的减少作用，同时均可通过调控突触前调控蛋白Munc13-1、Munc18-1的表达调节突触囊泡的启动。 3.盐酸硫必利、菖蒲郁金汤均对突触体病理形态结构有明显的改善作用，在药物干预后大鼠突触间隙缩小，突触囊泡数量明显增加。
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