摘要
背景与目的：舌鳞状细胞癌（tonguesquamouscellcarcinoma,TSCC）是最致命的头颈部恶性肿瘤之一，约占口腔癌发病率的50.5%，浸润性强，血管丰富，在早期极易发生转移，预后较差。由于TSCC的解剖部位特殊，目前在临床上尽管外科手术，放射疗法和化学疗法均取得了长足的进步，但TSCC患者的存活率仍然较低。我们期望通过基因靶向治疗TSCC，以降低其转移率和复发率，提高患者生存率和生活质量。我们课题组前期基因表达谱芯片结果显示吴茱萸碱处理后的舌鳞状细胞癌CAL-27细胞中上游基因ZMIZ1被显著抑制，前期研究显示ZMIZ1基因能抑制TSCC的侵袭转移，但对血管生成的影响并不清楚。本研究通过体内、体外实验观察舌鳞状细胞癌细胞敲减ZMIZ1基因后对血管生成的影响及PI3K/AKT通路相关因子表达的变化，探寻TSCC血管生成相关的生物标志物，为TSCC的基因治疗提供新的思路。 方法：通过WesternBlot实验验证舌鳞状细胞癌CAL-27细胞和人口腔黏膜癌前病变DOK细胞中ZMIZ1蛋白的表达；通过将慢病毒LV-ZMIZ1-RNAi转染到舌鳞状细胞癌细胞，建立稳定敲减ZMIZ1基因的舌鳞状细胞癌细胞株；通过transwell、CCK-8、小管形成、qRT-PCR、WesternBlot实验研究ZMIZ1在舌鳞状细胞癌血管生成中的作用，并检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、VEGF的表达，分析其可能的机制；使用PI3K通路激动剂740Y-P作用于ZMIZ1基因敲减的舌鳞状细胞癌细胞株，观察细胞血管生成相关表型的变化。通过鸡胚绒毛尿囊膜试验（CAM）检测敲减ZMIZ1基因对鸡胚血管生成的影响。裸鼠背部建立皮下异种移植瘤模型，观察敲减ZMIZ1基因对肿瘤血管生成的影响，HE染色观察裸鼠心、肝、脾、肺、肾组织学形态变化，HE染色、免疫组织化学检测瘤组织组织学形态及血管生成的相关指标，qRT-PCR和WesternBlot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、VEGF的表达变化。 结果： 1.WesternBlot结果显示ZMIZ1蛋白在CAL-27细胞中的表达量较高，在DOK细胞中的表达量较低（P＜0.05）。 2.Transwell、CCK-8、小管形成实验结果显示，ZMIZ1敲减组能够抑制舌鳞状细胞癌细胞的增殖，侵袭和血管生成（P＜0.05），qRT-PCR和WesternBlot结果显示敲减ZMIZ1基因降低了CAL-27细胞中PI3K、AKT、VEGFmRNA和蛋白的表达（P＜0.05），加入740Y-P后，ZMIZ1敲减组细胞的增殖、侵袭和血管生成能力均提高（P＜0.05）。 3.CAM结果显示，ZMIZ1敲减组条件培养基（CM）处理后的鸡胚其血管形成能力较低（P＜0.05）。 4.异种移植瘤模型中，ZMIZ1敲减组瘤体重量及体积均较小（P＜0.05），各组裸鼠之间饮食、饮水量无统计学差异。HE结果显示ZMIZ1敲减组组织中细胞异型性、异常核分裂像较少；各组裸鼠之间心、肝、脾、肺、肾组织病理表现无明显异常；免疫组织化学染色结果显示，ZMIZ1敲减组ZMIZ1、CD31表达较弱；qRT-PCR和WesternBlot结果显示ZMIZ1敲减组中PI3K、AKT、VEGFmRNA和蛋白的表达受到抑制（P＜0.05）。 结论：ZMIZ1基因促进了TSCC的血管生成和肿瘤进展，可能与激活PI3K/AKT信号通路有关，提示ZMIZ1可能是治疗TSCC的潜在抗血管生成靶点。
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