摘要
目的： 研究蓝萼甲素作用于肾细胞癌后，对其增殖、侵袭和转移的影响，并明确蓝萼甲素对PI3K/AKT通路所产生的影响。 方法： （1）网络药理学分析预测蓝萼甲素和肾细胞癌相关信号通路。 （2）将蓝萼甲素母液进行稀释，设置为五组浓度梯度（0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L），随后通过CCK8分别检测蓝萼甲素对肾癌细胞增殖的影响，并由此计算得出蓝萼甲素的IC50。随后将蓝萼甲素母液浓度依次稀释为0、2、4、8μmol/L四组，平板克隆实验检测蓝萼甲素对肾癌细胞克隆及增殖能力所产生的影响，流式细胞术检测蓝萼甲素对于肾癌细胞凋亡所产生的影响，Westernblot实验检测蓝萼甲素对PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT）的影响，以及对于凋亡相关因子（Bax、Bcl2、Caspase-3，Caspase-9）的蛋白表达情况的影响。 （3）将蓝萼甲素母液依次稀释为四组浓度（0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μmol/L），随后分别处理肾癌细胞786-0、A49824H，随后通过Transwell实验检测蓝萼甲素对肾癌细胞侵袭、转移所产生的影响。此外，蓝萼甲素分别处理肾癌细胞786-0、A49824H后，收集细胞提取总蛋白，最后再通过Westernblot实验分别检测蓝萼甲素对于侵袭、转移相关蛋白（N-cadherin、E-cadherin）的影响。 （4）将实验分为Control、6μmol/LGLA、6μmol/LGLA+IGF-1三组，CCK8和平板克隆检测肾癌细胞增殖的变化，Westernblot检测PI3K/AKT相关蛋白的变化。 （5）裸鼠皮下成瘤实验检测蓝萼甲素对肿瘤生长的影响，随后切除下肿瘤组织，采用免疫组织化学实验检测蓝萼甲素对KI67、PCNA等肿瘤细胞增殖相关标志物表达的影响。 结果： 1、网络药理学表明蓝萼甲素可能通过调控PI3K/AKT通路影响肾细胞癌的生物学功能。 2、蓝萼甲素呈现浓度依赖型抑制肾癌细胞的增殖，诱导凋亡增加，促进Bax、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9蛋白表达，同时抑制Bcl-2蛋白的表达。 3、蓝萼甲素可呈浓度依赖型抑制肾癌细胞侵袭、转移。在蓝萼甲素的作用下，E-cadherin表达被上调，N-cadherin蛋白的表达被下调。 4、蓝萼甲素组可显著抑制肾癌细胞的增殖，GLA+IGF-1组较GLA组对肾癌细胞增殖能力的抑制弱；GLA显著抑制PI3K/AKT信号通路，然而IGF-1可部分逆转GLA的抑制作用。 5、在裸鼠皮下肿瘤模型中，蓝萼甲素处理可抑制肿瘤生长，免疫组织化学结果显示KI67和PCNA表达减少。 结论： 肾细胞癌的增殖和侵袭转移能被蓝萼甲素通过PI3K/AKT信号通路抑制。
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