摘要
背景： 葛根素、齐墩果酸等化合物是中药中的常见活性成分，具有抗氧化、抗菌、抗过敏、抗肿瘤、抗老年痴呆、抗酒精性肝损伤等活性，临床上常作为辅助药物与其他西药联合应用以增加疗效，但其与化学药物的相互作用常被人们所忽略。其中，药物转运蛋白是介导药物体内相互作用发生的主要机制之一。钠依赖牛磺胆酸转运多肽（NTCP）属于SLC10A转运蛋白家族，除了转运胆汁酸和硫酸雌酮外，NTCP也常参与阿托伐他汀、瑞舒伐他汀等他汀类药物的转运。有研究发现，许多中药活性成分可影响NTCP的转运功能。因此，研究葛根素等常见中药活性成分与化学药物之间基于NTCP介导的相互作用及其机制有重要科学意义。 目的： 本课题旨在考察葛根素等常见中药活性成分对NTCP转运功能及其表达水平的影响，同时研究其对肝脏摄取阿托伐他汀及其药代动力学特征的影响，为指导临床合理用药提供实验与科学依据。 方法： 1、建立检测牛磺胆酸钠（TCNa）的LC-MS分析方法，评价葛根素等10种中药活性成分（葛根素、齐墩果酸、熊果酸、橙皮素、柚皮素、大黄素、金丝桃苷、槲皮素、黄芩素、水飞蓟素）对NTCP-HEK293T细胞中TCNa的摄取影响。 2、建立检测阿托伐他汀的LC-MS分析方法，考察葛根素等4种中药活性成分（葛根素、齐墩果酸、熊果酸、槲皮素）对HepG2细胞中阿托伐他汀摄取及NTCP表达的影响。 3、利用SD大鼠在体模型，研究葛根素连续给药对大鼠体内阿托伐他汀药代动力学及其肝组织中Ntcp表达的影响。 结果： 1、本实验建立的TCNa的LC-MS定量分析方法特异性、精密度和准确度较好，符合相关分析要求。在NTCP-HEK293T细胞中，TCNa的酶动力学参数Km与Vmax分别为13.05±4.55μM和482.1±39.4pmol/mgprotein/min。葛根素、齐墩果酸、熊果酸、槲皮素对NTCP-HEK293T细胞中TCNa的摄取有明显的抑制作用，其IC50值分别为8.32±5.84μM、12.07±8.07μM，10.03±7.00μM、6.52±3.76μM。 2、本研究建立的测定细胞样品中阿托伐他汀浓度的LC-MS方法在5~640nM范围内线性关系良好，精密度和准确度符合相关要求。摄取实验结果表明，葛根素、齐墩果酸、熊果酸、槲皮素均可一定程度减少阿托伐他汀在HepG2细胞中的摄取，其IC50值分别为3.93±1.59μM、4.48±1.58μM、5.88±2.38μM、4.60±1.25μM。Westernblot实验结果表明，齐墩果酸(20μM)、熊果酸(20μM)、葛根素（10μM）及槲皮素（10μM）干预24h后HepG2细胞中NTCP蛋白表达分别下降31.24%、44.55%、44.11%、41.92%。 3、大鼠实验中，对照组和葛根素给药组的阿托伐他汀药时曲线下面积（AUC0-t）分别是31.68±9.76ng/mL·h和40.96±4.52ng/mL·h，与对照组相比，100mg/kg葛根素连续给药7d后，AUC0-t增加了29.30%；最大血药浓度（Cmax）分别为10.30±3.53ng/mL和13.82±3.00ng/mL，增加了34.17%；消除半衰期（T1/2）分别为8.26±4.78h与14.95±3.12h，增加了80.99%；清除率（CLz/F）分别为1.56±0.49L/h/kg与1.01±0.12L/h/kg，下降了35.26%。与对照组相比，葛根素及阳性对照药利福平均可抑制大鼠肝组织中Ntcp蛋白表达，其抑制率分别为34.32%和30.74%。 结论： 1、葛根素、齐墩果酸、熊果酸、槲皮素均可不同程度地抑制NTCP介导的TCNa的摄取，是NTCP潜在的抑制剂，临床上可能发生基于NTCP介导的药物相互作用。 2、葛根素、齐墩果酸、熊果酸、槲皮素均可抑制HepG2细胞中阿托伐他汀的摄取及NTCP的表达，提示临床上二者联用可能发生基于NTCP介导的相互作用。 3、100mg/kg葛根素连续给药有可能通过下调大鼠肝组织Ntcp表达、减慢大鼠体内阿托伐他汀的消除过程从而增加其暴露量，进一步提示二者联用可能发生基于NTCP介导的相互作用。
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