摘要
目的： 膀胱癌在所有常见癌症中发病率居第十位，死亡率较高，其发病率呈上升趋势。有研究表明，中药蒺藜具有降血糖、抗衰老的作用。同时，蒺藜皂苷D也有抗肿瘤的作用。如可以抑制乳腺癌、卵巢癌的增殖、生长，促进其凋亡，但在膀胱肿瘤未见相关报道。本研究的目的是观察不同浓度的蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡功能的影响，探讨蒺藜皂苷D抑制膀胱癌增殖、促进凋亡的作用机制，有望为膀胱癌的中药治疗提供理论基础和科学依据。 方法： 1.观察蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞增殖的影响： 分别选取10mg/L、25mg/L、50mg/L、80mg/L、100mg/L不同浓度的蒺藜皂苷D干预膀胱癌T24细胞，以普通培养基干预为阴性对照组，50％的酒精干预为阳性对照组，采用MTT（噻唑蓝）比色法，检测细胞增殖率；采用实时无标记动态细胞分析技术（RTCA）动态观察细胞生长情况，观察蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞生长、增殖的影响，同时计算蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞的半数抑制率（IC50）。 2.观察蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞凋亡的影响： 以实验1中的IC50的药物干预浓度作为中位数设定三个浓度梯度，以此三个浓度梯度的蒺藜皂苷D作为低、中、高药物浓度干预膀胱癌T24细胞，以普通培养基干预为阴性对照组，采用流式细胞术，检测细胞凋亡率，观察蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞凋亡的影响。 3.探讨蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞凋亡机制： 以实验2中的低、高浓度蒺藜皂苷D分别干预膀胱癌T24细胞，以普通培养基干预为阴性对照；采用Westernblot实验,检测细胞凋亡关键蛋白Blc-2及Bax，观察蒺藜皂苷D药物干预对细胞凋亡关键蛋白表达的影响。 结果： 1.蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞有一定的细胞毒作用,各药物干预组与对照组比较其存活率都有显著性差异,同时抑制率与药物浓度存在明显正向剂量-效应关系。根据药物浓度及对应的存活率，计算出蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞的IC50为67.24mg/L。 2.使用蒺藜皂苷D干预膀胱癌细胞12小时后，不同浓度的蒺藜皂苷D均可促进膀胱癌T24细胞凋亡，且其促凋亡作用与药物浓度有着明显的剂量-效应关系，即药物浓度越高，其促凋亡作用越明显。 3.药物干预组Blc-2蛋白表达较对照组明显降低，并呈剂量-表达关系，即药物浓度越高Blc-2蛋白表达水平越低，差异明显。但Bax蛋白的表达趋势恰好相反，药物干预组Bax蛋白的表达，与对照组相比显著升高，且呈剂量-表达关系，即药物浓度越高Bax蛋白表达水平越高，差异显著。 结论： 蒺藜皂苷D对膀胱癌T24细胞生长增殖具有较明显的抑制作用，对其凋亡有促进作用，且其作用与药物干预浓度呈显著的剂量-效应关系；蒺藜皂苷D促进Bax蛋白的表达，抑制Blc-2蛋白表达，其作用与药物干预浓度呈显著的剂量-效应关系。由此我们初步推测蒺藜皂苷D可能是通过调控凋亡关键蛋白Bcl-2及Bax的表达，以此促进膀胱癌T24细胞凋亡及抑制其生长增殖，发挥其细胞毒性作用，有可能为膀胱癌的中药治疗提供新的治疗手段。
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