摘要
研究背景和目的： 原发性肝癌是全世界最常见且最难治疗的恶性肿瘤之一，其中，肝细胞癌(HepatocellularCarcinoma，HCC)占85%～90%以上，根据国家癌症中心2020年统计的数据显示，其发病率居所有恶性肿瘤的第六位，死亡率高达第三。肝细胞癌侵袭力强、恶性程度高、生存期短，且治疗效果欠佳，因此，深入研究肝细胞癌生长、侵袭、转移的分子机制，寻找新的治疗靶点，对于肝细胞癌的精准治疗具有更重要的意义。 FBXO7蛋白是F-box蛋白家族的成员之一，含有40个氨基酸残基组成的特殊结构域，参与特定蛋白质的泛素化降解过程。该蛋白在调节细胞周期、蛋白酶体活性以及线粒体吞噬等过程中占有重要地位。有研究表明，FBXO7基因缺陷与帕金森病的发生密切相关。不仅如此，FBXO7在肿瘤发生和发展过程中的作用逐渐引起重视，研究证实FBXO7与纤维肉瘤、肺恶性肿瘤、淋巴瘤的发展可能存在关联。有学者发现FXB07能够泛素化降解与肝细胞癌发生发展相关的肝癌上调蛋白(HURP)、糖原合成酶激酶-3β(Gsk3β)等，但是它在肝细胞癌中具体作用尚未被深入研究。 本文旨在研究FBXO7在肝细胞癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞生长、迁移、侵袭等生物学功能的影响。 研究方法： 1、使用免疫组化检测22例人肝细胞癌组织和正常肝组织中FBXO7蛋白的表达情况。基于Kaplan-MeierPlotter数据库对肝细胞癌患者生存数据进行统计分析，研究FBXO7表达水平与肝细胞癌患者预后之间的关系，采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，通过LogRank统计学方法分析FBXO7高表达组与低表达组患者的OS、PFS、RFS、DSS的差异。 2、采用Real-timePCR和Westernblot分别比较FBXO7在人正常肝细胞L02和三株肝癌细胞（LM3、HepG2、SMMC-7721）中的mRNA和蛋白质表达水平。 3、体外培养人肝癌细胞株LM3和HepG2，实验组转染过表达FBXO7质粒，对照组转染空载质粒。 4、采用CCK-8和克隆形成实验检测FBXO7对肝癌细胞LM3和HepG2体外增殖能力的影响。 5、采用划痕实验检测FBXO7对肝癌细胞LM3和HepG2体外迁移能力影响。 6、采用侵袭实验检测FBXO7对肝癌细胞LM3和HepG2体外侵袭能力的影响。 7、建立肝癌裸鼠皮下移植瘤的模型，检测FBXO7对肝癌细胞在裸鼠皮下增殖能力的影响。 8、通过尾静脉注射肝癌细胞，构建肝癌肺转移模型，检测FBXO7对肝癌细胞体内转移能力的影响。 研究结果： 1、FBXO7在人肝细胞癌组织中的表达显著低于正常肝组织。数据库的分析结果显示FBXO7表达量越低患者的预后越差。 2、肝癌细胞株LM3、HepG2、SMMC-7721中FBXO7在mRNA和蛋白质水平的表达显著低于正常肝细胞株L02。 3、CCK8检测结果表明，FBXO7过表达组的肝癌细胞OD值较对照组减小。克隆形成实验结果显示FBXO7过表达组的肝癌细胞克隆数目明显减少。 4、划痕实验结果显示，和对照组相比，FBXO7过表达组的肝癌细胞体外迁移距离缩短。 5、Transwell侵袭实验表明，和对照组相比，FBXO7过表达组穿膜细胞数减少。 6、裸鼠皮下成瘤实验显示FBXO7过表达组中肝癌皮下移植瘤体重量和体积较对照组明显减小。 7、小鼠尾静脉肺转移模型中，FBXO7过表达组肺转移瘤体积及数目均少于对照组。 研究结论： FBXO7在肝细胞癌组织中呈现低表达，其表达水平越低，肝癌患者的临床预后越差。FBXO7可抑制肝癌细胞的生长、迁移及侵袭、转移能力，FBXO7对肝癌细胞生物学行为的影响，或能为肝癌的精准治疗提供新的参考价值。
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