摘要
三阴性乳腺癌(TNBC)以侵袭性强、复发快、预后差而闻名。免疫治疗，特别是嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗，作为治疗TNBC的新方法吸引了越来越多的关注。如何精确靶向识别特定的肿瘤抗原和设计有效的CAR-T是CAR-T治疗的众多挑战之一。首先，我们证明了表皮生长因子受体(EGFR)在TNBC中高表达，因此我们构建了第三代靶向EGFR的CAR(EGFRCAR)，这个EGFRCAR包含一段IL2受体的信号肽、一段西妥昔单抗的抗EGFRscFv、一段间隔区（lgG1Fc或Hinge）、一段CD28穿膜域和CD28、人4-1BB、CD3ζ的胞内信号域，并在体内外观察到感染EGFRCAR慢病毒的原代T淋巴细胞(EGFRCAR-T)对TNBC的杀伤作用。通过RNA测序分析揭示了激活的EGFRCAR-T细胞的表型特征和信号通路，TNBC细胞刺激诱导了初始(na(i)ve)相关EGFRCAR-T细胞的扩增并增强了其持久性。此外，EGFRCAR-T细胞在TNBC细胞中激活了干扰素γ（IFNγ）、颗粒酶B(GZMB)-穿孔素(perforin)-PARP和Fas-FADD-caspase信号通路，暗示了EGFRCAR-T对TNBC细胞杀伤的凋亡机制。最终，我们证明了第三代EGFRCAR-T细胞在体外对TNBC细胞生长具有特异性的抑制作用，且对正常的乳腺上皮细胞或雌激素受体阳性的乳腺癌细胞具有非常有限的细胞杀伤作用。这种针对TNBC的杀伤能力同时在异种移植小鼠体内模型中得到了进一步的证实，并且同时证实了我们设计的EGFRCAR-T具有较小的脱靶毒性。综上，我们证明了EGFR在TNBC中是一个有效的免疫治疗靶点，并且EGFRCAR-T对TNBC表现出了强大而特异性的抗肿瘤活性，提示了这种第三代EGFRCAR-T作为临床治疗TNBC免疫治疗工具的潜力。
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