摘要
甲磺酸伊马替尼是一种高度选择性酪氨酸激酶小分子抑制剂，主要用于慢性粒细胞白血病的治疗。本文采用核磁共振技术(NMR)对甲磺酸伊马替尼进行结构解析及其原料药含量测定研究。同时利用基于核磁共振的代谢组学技术探讨了不同晶型甲磺酸伊马替尼对HepG2肿瘤细胞的抑制作用。本文分以下两部分： 第一部分，运用一维(1D)和二维(2D)NMR技术对甲磺酸伊马替尼的氢碳信号进行了全归属。以马来酸为内标，建立了甲磺酸伊马替尼含量测定的定量核磁共振谱（qNMR），并对该方法进行了方法学验证。结果表明，甲磺酸伊马替尼质量浓度在2.17～5.43mg/mL范围内线性关系良好，精密度、重复性和稳定性的RSD为0.93%，1.6%和1.08%。采用该方法测得甲磺酸伊马替尼原料药的含量为98.6%，与高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)的测定结果（98.2%）基本一致。 第二部分，利用基于核磁共振的代谢组学技术探讨了甲磺酸伊马替尼的α，β两种晶型对肿瘤细胞HepG2生长过程的抑制作用。首先，研究了两种晶型抑制HepG2细胞的IC50值。α晶型与β晶型的IC50值分别为8.32μM和13.78μM。其次，采用IC50值的浓度分别将α，β两种晶型与HepG2细胞共同培养，分别取24，48，72小时后的细胞培养液及细胞提取物进行核磁共振数据采集。再次，运用主成分分析法对细胞培养液和细胞提取物数据进行分析，构建偏最小二乘判别分析模型和正交偏最小二乘判别分析模型，鉴定实验组和对照组之间的差异性代谢物，并将结果与单因素方差分析结果进行对比验证。最后，对筛选出的24种差异性代谢物进行代谢通路分析，获得甲磺酸伊马替尼影响HepG2的代谢途径。结果显示,受影响最大的代谢通路是丙酮酸代谢途径，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢途径和D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢途径。α和β晶型均通过调控氨基酸的代谢来抑制细胞生长，其中α晶型还通过丙酮酸代谢途径来抑制细胞生长。
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