摘要
目的：乳腺癌是是女性最常见的恶性肿瘤，是发展中国家癌症死亡的最常见原因，在发达国家其死亡率仅次于肺癌。更糟糕的是，乳腺癌患者逐渐对现有的治疗方法产生了耐药性。为了实现长期的疾病控制，迫切需要发现和开发新的、有效的癌症药物。近年来，癌症免疫治疗在造血和实体肿瘤的治疗中显示出了良好的潜力。越来越多研究表明微生物及其代谢产物表现出抗肿瘤的作用。ΔA146Ply是肺炎链球菌溶血素的减毒突变体，之前的研究证明ΔA146Ply具有作为免疫调节剂的潜力，但其是否具有抗乳腺癌作用尚不清楚。小檗胺(BBM)是从传统中药三颗针中分离得到的一种天然双苄基异喹啉生物碱。在乳腺癌的研究中，BBM已被证明能够抑制肿瘤细胞的生长、迁移和侵袭。但BBM是否抑制乳腺癌的体内生长仍有待证实。在本研究中，旨在探寻ΔA146Ply与BBM发挥抗乳腺癌的疗效及作用机制，为乳腺癌的治疗提供了一种新的选择，为ΔA146Ply作为抗肿瘤药物的开发奠定理论基础。 方法：为明确ΔA146Ply和BBM体外的抗乳腺癌效应，分别用CCK8实验检测细胞的增殖，流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期分布，Western Blot法检测细胞增殖和凋亡相关细胞内蛋白的表达，Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。为明确ΔA146Ply和BBM体内抗乳腺癌效应，将4T1细胞皮下接种到BALB/c小鼠中来构建同种异体小鼠乳腺肿瘤模型。通过比较生理盐水对照组，ΔA146Ply和BBM单独及联合用药组肿瘤体积，小鼠体重和生存率来评估联合疗法在体内的效应。为初步探索ΔA146Ply和BBM在体内发挥抗乳腺癌的作用机制，使用免疫组化（IHC）和TUNEL实验分析治疗后第9天和第15天肿瘤组织的增殖和凋亡，通过流式细胞术对肿瘤浸润的髓系和淋巴细胞亚群进行分析，采用ELISA法检测肿瘤组织和血清中的细胞因子。并通过血清生化分析和肿瘤病理学分析评估ΔA146Ply和BBM在体内的毒性。 结果：体外实验结果表明，ΔA146Ply和BBM联合使用可显著抑制乳腺癌细胞的增殖，降低增殖相关信号p-Akt和p-ERK的水平。联合治疗后，凋亡的乳腺癌细胞百分率和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（CC3）裂解水平增加，表明联合治疗可诱导乳腺癌细胞凋亡。细胞周期分布分析表明，联合治疗使得人乳腺癌细胞周期阻滞在G1期，小鼠乳腺癌细胞周期阻滞在S期。Transwell分析表明，联合疗法可显着抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。体内实验结果表明，联合用药组的肿瘤体积明显小于对照组。尽管联合治疗不能改善荷瘤小鼠的整体存活率，但延长了它们的平均生存时间。这四组小鼠的体重没有显著差异，表明荷瘤小鼠可以耐受ΔA146Ply或BBM治疗。免疫组织化学（IHC）分析和TUNEL实验结果显示，联合治疗在体内可抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡。细胞因子分析显示联合治疗组血清IFN-γ水平明显升高。流式细胞术分析显示在治疗后第9天和第15天，联合治疗组中CD4-CD8-T细胞比例显著增加，Treg细胞比例明显减少。这些结果提示了ΔA146Ply和BBM联合治疗活化了系统性抗肿瘤免疫反应。血清生化和病理分析表明，联合治疗对荷瘤小鼠没有明显的肝肾毒性，减轻了荷瘤小鼠的肺损伤，并有效地抑制了肿瘤转移。 结论：综上所述，本研究确定了ΔA146Ply和BBM联合治疗的有效性和安全性。体外实验结果表明，ΔA146Ply和BBM联合治疗可显著抑制乳腺癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，阻滞细胞周期，抑制肿瘤细胞迁移和侵袭。体内实验结果表明，联合治疗有效地活化系统性抗肿瘤免疫反应，延长了荷瘤小鼠的平均生存时间。我们的研究为乳腺癌，特别是三阴性乳腺癌提供了新的治疗选择。
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