摘要
目的：血管紧张素-（1-7）（angiotensin-(1-7)，Ang-(1-7)）已被证实为一种重要的抗炎和抗纤维化因子，但其具体机制尚不明确。本研究旨在探讨血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme2，ACE2）-Ang-(1?7)-Mas受体轴调控炎症状态下的巨噬细胞表型转换以及盲肠结扎穿孔诱导的脓毒血症小鼠炎症的相关信号转导机制。 方法：实验分为两个部分：第一部分，将体外培养巨噬细胞（RAW264.7）分为6组：对照组，LPS组（Lipopolysaccharides），LPS+Ang-(1-7)组，LPS+Ang-(1-7)+A-779组，Ang-(1-7)组，A-779组。使用酶联免疫吸附法（ELISA）、Western blot、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测巨噬细胞促炎及抗炎因子的释放水平。流式细胞术检测M1型巨噬细胞表面标志物CD86、M2型巨噬细胞表面标志物CD163的表达。Western blot和免疫荧光检测炎症相关核转录因子-κB（nuclear transcription factor-κB,NF-κB）信号通路和丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路的变化。第二部分，随机将40只雄性昆明小鼠（KM小鼠）分为5组：对照组，假手术+生理盐水组，假手术+Ang-(1-7)组，脓毒血症+生理盐水组，脓毒血症+Ang-(1-7)组。ELISA检测各组小鼠血清中促炎及抗炎因子水平。苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE）观察脾脏结构及炎症细胞浸润情况。免疫荧光、流式细胞术检测小鼠脾脏中巨噬细胞的总量及M1、M2表型占比情况。免疫组化、Western blot检测脾脏中NF-κB和MAPKs信号通路的变化。 结果：体外实验证实Ang-(1-7)抑制炎症诱导的巨噬细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）促炎因子的表达，促进白介素4（IL-4）和白介素10（IL-10）抗炎因子的表达。Ang-(1-7)降低M1型巨噬细胞标志物CD86和TNF-α的表达，升高M2型巨噬细胞标志物CD163和精氨酸酶1（arginase1，ARG1）的表达，促使巨噬细胞朝向M2型转变。同时ACE2-Ang-(1?7)-Mas轴可通过影响TLR4受体的表达，抑制NF-кB和MAPKs信号通路从而达到调控巨噬细胞表型转换的作用。体内实验证实Ang-(1-7)可缓解脓毒血症小鼠脾亢及脾脏中巨噬细胞浸润，抑制脾中M1型巨噬细胞极化并促使其朝向M2型转变。同时ACE2-Ang-(1?7)-Mas轴能抑制脾脏中TLR4受体及其介导的NF-кB和MAPKs信号通路的表达，起到抗炎的作用。 结论：（1）ACE2-Ang-(1?7)-Mas轴可降低炎症刺激下巨噬细胞及脓毒血症小鼠的炎症应答，促进抗炎因子的释放。（2）ACE2-Ang-(1?7)-Mas轴可有效抑制M0型巨噬细胞朝向M1型极化，同时增加M2型巨噬细胞占比。（3）ACE2-Ang-(1?7)-Mas轴通过抑制TLR4受体介导的下游NF-κB和MAPKs信号通路，抑制巨噬细胞导致的炎症反应。
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