摘要
背景与目的： 适当的咬合刺激能够维持牙周组织内环境的稳定，调节牙周组织的形态和功能。然而，临床上常见到咬合力异常的情况，当咬合力大小发生改变以后，牙周组织的结构也会发生相应的变化，以适应咬合力的改变，甚至发生牙周组织的破坏。牙龈的形态、颜色、位置对牙周组织的健康以及口腔美学至关重要，牙龈的改建也是影响正畸效果的重要因素。本实验通过拔牙法建立高咬合力动物模型，观察咬合力增强对牙龈组织改建的影响，并初步探讨其中的机制。 方法： 30只4周龄雄性昆明小鼠，无龋坏，无牙周组织疾病，牙列完整。将小鼠随机分为空白对照组和实验组，每组15只。适应性喂养1周后开始实验。局麻下依次拔除实验组小鼠右侧上颌第一、二、三磨牙，分别于拔牙后3天(postextraction day3,PED3)、拔牙后7天(PED7)、拔牙后14天(PED14)、拔牙后28天(PED28)以及拔牙后56天(PED56)，每组每次随机选取3只小鼠麻醉后处死，经4%多聚甲醛循环内固定后取左侧下颌骨组织块，进行脱钙，包埋，沿左侧下颌第一磨牙近远中方向行连续组织切片，通过苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色、马松（Masson）染色进行组织学观察；通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling,TUNEL)法染色检测细胞凋亡；免疫组织化学染色方法检测增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)；p65、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)以及β-catenin的表达。在显微镜下观察牙龈组织结构改建，并运用图像分析软件进行定量计算。 结果： 1.HE染色结果：对照组中，牙龈胶原纤维规则有序排列；而在PED14，胶原纤维排列明显紊乱；在PED28，胶原纤维束增粗，排列变得规则，血管增生明显。马松染色结果显示，在PED28，牙龈组织中新生胶原沉积明显增加。 2.TUNEL法染色结果：高咬合力使牙龈组织中凋亡细胞数量快速增加，于PED3达到峰值，随后表达下降，到PED14，与对照组水平相似； 3.免疫组织化学检测结果：咬合力的增加导致了PCNA、IL-1β、TNF-α、VEGF、β-catenin的表达增强。其中PCNA免疫组化染色分析提示细胞增殖反应于PED7达高峰，随后阳性细胞数目虽然有所降低，但仍保持较高水平，至PED56与对照组比较仍有显著差异（P＜0.05）；VEGF检测表现出相似的变化趋势，阳性细胞数目在PED14达到峰值，提示组织的新生。TNF-α阳性细胞数目在PED7达峰值，至PED28回落至初始水平；而p65、IL-1β、β-catenin阳性细胞数目在PED14达到峰值，分别至PED28、PED28、PED56与对照组比较没有显著差异（P＞0.05）。 结论： 高咬合力在牙龈组织引发了一系列包括凋亡和增殖的细胞和分子学反应，从而发生改建以适应新的咬合状态，NF-κB和Wnt/β-catenin信号通路可能在这一过程中发挥调控作用。
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