摘要
乙肝疫苗预防婴幼儿乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染是控制乙肝传播的重点。乙肝疫苗计划实施20余年来，早期纳入计划免疫的人群已进入孕龄期，孕龄期女性群体中乙肝表面抗体（抗-HBs）阳性率越来越高。抗-HBs可通过胎盘传给胎儿，推测新生儿体内来自母亲的抗体会部分中和新生儿出生后按0-1-6月方案注射的乙肝疫苗，进而影响乙肝疫苗的接种效果，给全社会阻断乙肝传播计划的有效实施带来阻力。本研究通过大样本人群调查及小鼠实验对母亲抗-HBs是否影响婴幼儿乙肝疫苗接种效果这一问题做系统而深入的探讨。该研究分为三部分，具体阐述如下。 第一部分：青岛地区孕产妇、婴幼儿乙肝表面抗体的流行现状及母亲乙肝表面抗体对婴幼儿乙肝疫苗免疫应答的影响 目的：了解孕产妇及婴幼儿抗-HBs的阳性率，进而了解乙肝疫苗的接种效果；进一步分析母亲抗-HBs通过胎盘传给新生儿是否会影响乙肝疫苗的接种效果，以期为优化新生儿乙肝疫苗接种策略提供一定的依据。 方法：以电子病历数据库为基础，系统收集2017年1月1日-2019年12月31日在青岛市妇女儿童医院进行乙肝标志物（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc）定量检测的孕产妇及婴幼儿的相关信息，纳入HBsAg阴性、抗-HBs阳性的病例。在电子病历数据库中找出配对的母亲及婴幼儿，分析母亲及婴幼儿抗-HBs滴度的特点及相关性。 结果：共纳入孕产妇1435名，其抗-HBs的阳性率为58.82%，其中，30-34岁组孕产妇的抗-HBs阳性率高于35岁以上组（62.57%vs.53.21%，P=0.0043）。抗-HBs的平均滴度（log10转化）为1.49（95%CI:1.43-1.55）IU/L，抗-HBs滴度≥1000IU/L群体所占的比例为2.51%。 共纳入婴幼儿6550名，其抗-HBs的阳性率为90.82%。婴幼儿抗-HBs阳性率在1岁之内随着月龄的增长呈现上升趋势，1-30天组婴幼儿抗-HBs的阳性率为73.10%，6-12个月组婴幼儿抗-HBs的阳性率最高为96.22%，＞2岁组婴幼儿抗-HBs的阳性率降至80.83%。抗-HBs滴度≥1000IU/L婴幼儿的比例为3.22%。抗-HBs滴度≥1000IU/L在男、女中均为1-2岁组所占比例最高，而在1-30天、1-6个月组无分布。男、女中平均抗-HBs滴度（log10转化）为1.91（95%CI:1.89-1.92）IU/L，3187例男性（48.78%）的抗-HBs滴度（log10转化）低于3346例女性（1.83vs.1.98IU/L，P＜0.0001）。 在配对母亲及子女的病例中，母亲抗-HBs滴度≥500IU/L时，婴幼儿抗-HBs滴度100-500IU/L所占的比例最高，为8.06%。对母亲和婴幼儿抗-HBs滴度的分布做一致性检验，得出Kappa值为0.48，为中等一致性。1日龄新生儿中抗-HBs水平（log10转化）与母亲抗-HBs水平存在线性回归关系（β=1.19，P＜0.0001），但在2-30日龄和30日龄以上的婴幼儿中，二者未显示显著关联（P＞0.05）。另外，本研究未显示出婴幼儿日龄是影响婴幼儿抗-HBs阳性率的因素（P＞0.05）。 结论：孕产妇抗-HBs的阳性率为58.82%，婴幼儿抗-HBs的阳性率为90.82%，孕产妇及婴幼儿的抗-HBs高应答率均较低。1日龄新生儿与母亲的抗-HBs滴度存在线性相关，提示母亲的抗-HBs通过胎盘传给婴幼儿，可能会抑制婴幼儿出生后乙肝疫苗接种的免疫效果。 第二部分：乙肝免疫球蛋白对小鼠乙肝疫苗接种后体液免疫效果的影响 目的：由于母亲抗-HBs可通过胎盘传给胎儿，新生儿出生时体内即存在一定量的抗-HBs，可能会影响新生儿乙肝疫苗的接种效果。在中国，对接种乙肝疫苗前后的新生儿进行采血并检测抗-HBs存在诸多困难。因BALB/c小鼠是免疫研究的常用动物，本研究通过BALB/c小鼠实验对这一问题进行初步探讨。 方法：通过给BALB/c小鼠注射乙肝免疫球蛋白（HBIg），模拟新生儿从母亲体内获得抗-HBs。通过给小鼠接种三针乙肝疫苗，模拟新生儿按0-1-6月方案接种乙肝疫苗。饲养BALB/c小鼠361只，按照乙肝疫苗注射剂量（2μg,5μg）将小鼠分为A,B两组，按照HBIg注射剂量（50IU,25IU,0IU）及乙肝疫苗接种时间间隔（0-4-8周,0-1-2周），每组分为4个亚组：HBIg0IU（0-4-8周）组，HBIg25IU（0-4-8周）组，HBIg50IU（0-4-8周）组，HBIg0IU（0-1-2周）组。每个亚组设性别、注射部位等因素。所有小鼠记录：性别、体重、周龄、乙肝疫苗剂量、HBIg剂量、是否联合免疫、乙肝疫苗注射途径、乙肝疫苗接种时间方案等。所有小鼠于第3针乙肝疫苗接种后4周采血，检测抗-HBs。通过0-4-8周方案各组的比较，分析影响小鼠乙肝疫苗接种效果的因素。通过HBIg0IU（0-4-8周）组与HBIg0IU（0-1-2周）组比较，分析乙肝疫苗接种时间间隔对免疫效果的影响。 结果：361只小鼠中，抗-HBs＜10mIU/mL10例，10mIU/mL≤抗-HBs＜100mIU/mL31例，抗-HBs≥1000mIU/mL199例。在50IU、25IU、0IUHBIg组中，抗-HBs＜100mIU/mL小鼠所占比例分别为20.6%、23.1%、1.1%。HBIg剂量为25IU、50IU时，抗-HBs无应答或低应答的风险是0IU组的42.97（95%CI:5.32-347.04）、31.61（95%CI:3.92-255.06）倍（P＜0.01）。在5μg、2μg乙肝疫苗组中，抗-HBs＜100mIU/mL小鼠所占比率分别为4.5%、25.6%。5μg乙肝疫苗组抗-HBs无应答或低应答的风险是2μg组的0.09（95%CI:0.03-0.25）倍（P＜0.0001）。在肌肉注射及皮下注射组中，抗-HBs＜100mIU/mL所占的比率分别为6.1%和23.7%，OR值及95%CI为0.14(0.06-0.35)（P＜0.0001）。在50IU、25IU、0IUHBIg组中，5μg乙肝疫苗组抗-HBs（log10转化）的平均滴度分别为3.97±1.02、4.29±1.07、5.09±0.36mIU/mL（P＜0.0001），2μg乙肝疫苗组抗-HBs（log10转化）的平均滴度分别为2.56±0.85、3.32±1.21、4.89±0.59mIU/mL（P＜0.0001）。0-4-8周与0-1-2周接种方案相比，5μg乙肝疫苗组抗-HBs（log10转化）的平均滴度分别为5.09±0.36vs.4.54±0.83mIU/mL（P=0.003），2μg乙肝疫苗组抗-HBs（log10转化）的平均滴度分别为4.89±0.59vs.3.97±0.85mIU/mL（P＜0.0001）。多因素logistic回归分析显示，0IUHBIg、5μg乙肝疫苗、肌肉注射是促进小鼠抗-HBs≥1000mIU/mL的独立因素。小周龄（3、4周龄）是影响小鼠存活的因素，3、4、8周龄小鼠接种乙肝疫苗后存活率分别为45.9%、49.3%、96.6%（P＜0.05）。周龄未影响小鼠乙肝疫苗接种的免疫应答效果（P＞0.05）。 结论：HBIg对小鼠乙肝疫苗有效应答率及应答水平起负作用，增加乙肝疫苗剂量、延长乙肝疫苗接种时间间隔、肌肉注射可取得更好的免疫效果。周龄过小不宜过早接种乙肝疫苗。
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