摘要
微藻种类多、分布广，从自然界找到更多具有优良性状的藻株具有科学研究与应用价值。本研究利用高通量测序对不同地区的设施农业场所土壤样品进行微藻生物多样性的分析，比较各个样品中微藻物种的丰度、结构和优势藻种。同时对包括上述设施农业场所土样以及城市水域水样中的可培养微藻通过平板划线法进行了分离和纯化培养，并运用形态学和ITS系统分析相结合的方法对微藻分类鉴定，以期为微藻资源的收集、保存及后续研究提供依据。利用两步冷冻法对模式微藻莱茵衣藻进行了液氮超低温保存工作，旨在为上述分离纯化完成的藻种提供长期保存方法。主要研究结果如下： 1.高通量测序分析发现：在属分类水平下，各个设施农业场所样本中所含属的相对丰度及优势藻群不尽相同，样本1A-1真核微藻相对丰度前五为：四囊藻属、绿球藻属、棕鞭藻属、小球藻、衣藻；样本2B-1真核微藻相对丰度前五为：绿球藻属、拟杆藻属、克里藻属、衣藻、小球藻；样本2B-2真核微藻相对丰度前五为：拟杆藻属、绿球藻属、无隔藻、克里藻属、小球藻；样本3C-1真核微藻相对丰度前五为：绿球藻属、衣藻、油球藻、拟杆藻属、小球藻；样本4D-1真核微藻相对丰度前五为：绿球藻属、油球藻、拟杆藻属、衣藻、克里藻属。通过高通量测序可以定量比较各个样本中微藻群落组成和多样性的相对差异，分析结果表明五个土壤样品中绿球藻属的相对丰度及优势凸显，拟杆藻属、小球藻、衣藻次之。 2.成功从以廊坊蔬菜大棚为代表的设施农业土样中分离鉴定了16株微藻，经分析得出：其中衣藻属8株，原管藻属4株，栅藻属3株，片球藻属1株。 3.以保定市护城河滨河公园段为代表的城市水域采集水样，从中分离鉴定出46株微藻，其中小球藻属25株，微芒藻10株，腔棘藻属5株，链带藻属、蹄形藻属各3株，空星藻属2株，单针藻属、肾壁藻属、Selenastraceaesp.、栅藻属各1株。 4.采用超低温保藏法对模式微藻—莱茵衣藻cc503进行保存，用双醋酸荧光素(FDA)和碘化丙啶(PI)双重荧光染色法分别对液氮低温保存15天、40天、17个月和21个月的藻细胞进行染色，用流式细胞仪进行细胞存活率检测，其存活率分别为76.10%、67.60%、49.87%和39.47%；另外利用浮游植物分类荧光仪对不同保存时间的藻细胞的最大光合效率Yield(Y)检测，其中保存21个月的相比对照下降了83%；通过测定细胞叶绿素的浓度来绘制生长曲线。上述细胞存活率、最大光合效率和叶绿素浓度分析表明，保存21个月后莱茵衣藻生长潜能及生理状态与对照基本一致，证明液氮超低温保藏可有效维持莱茵衣藻细胞活力，同时也为其他微藻的长期保存提供了借鉴。
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