摘要
目的：1.通过观察黄芪、半枝莲为君药配伍组成的芪莲合剂（QilianMixture，QLM）治疗气阴两虚型IIIB-IV期非小细胞肺癌（Non-Small-CellLungCancer，NSCLC）患者的临床疗效，择出符合纳入标准且中医辨证为气阴两虚型IIIB-IV期NSCLC患者作为实验对象，观察两组患者在治疗前后的Zubrod-ECOG-WHO评分(ZPS，5分法)、实体瘤大小、中医证候积分、骨髓抑制、胃肠道反应等方面毒副反应等具体指标的变化，从而为中西医结合治疗肺癌提供新方法。 2.通过黄芪-半枝莲有效活性成分筛选及组分配对研究其对A549细胞株的增殖作用机制的实验研究，筛选出最佳组分，为黄芪-半枝莲药对中的有效活性成分治疗NSCLC的临床应用提供实验依据与支撑。 方法：1.临床研究：通过收集2019年9月至2021年2月就诊于山东省中西医结合医院、山东省中医院及山东省肿瘤医院门诊及病房的70例患者为试验对象，将所有试验对象按照随机分组原则分为试验组35例（A组）与对照组35例（B组）。A组治疗方案为芪莲合剂联合化疗药物；B组为单纯化疗治疗，比较两组患者在治疗前后的Zubrod-ECOG-WHO(ZPS，5分法)、中医证候积分、两组患者在骨髓抑制、胃肠道反应等方面的疗效对比。 2.细胞实验：搜索TCMSP数据库，对黄芪、半枝莲君药药对的有效活性成分进行筛选和分析，选取黄芪有效成分芒柄花黄素、槲皮素和半枝莲有效成分木犀草素、乌索酸，有效成分按照两两配对原则，形成木犀草素-槲皮素、木犀草素-芒柄花黄素、乌索酸-芒柄花黄素、乌索酸-槲皮素四组组分配对实验组，根据每组有效成分在芪莲合剂中的含量并参考已有文献，摸索其合适实验细胞浓度，研究四组组分对A549细胞株增殖的作用机制。通过CCK-8细胞增殖实验探索木犀草素-槲皮素组、木犀草素-芒柄花黄素组、乌索酸-芒柄花黄素组、乌索酸-槲皮素组四组的OD值，测定并计算各组组分在药物浓度分别为0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L时的半数抑制浓度IC50，选取最佳药物浓度，平板细胞克隆形成实验观察并计算细胞的群体依赖性和增殖能力，q-PCR实验检测IL-6、HIF-α、TGF-βmRNA表达，观察在药物浓度一致和相同用药时间干预的情况下，观察不同有效活性组分对细胞增殖的作用机制。 结果：1.临床研究显示：A、B两组患者在年龄、性别、病理学类型、临床分期、BMI指数等一般临床资料上P＞0.05，表明两组数据差异无统计学意义，具有可比性；治疗后两组患者实体瘤客观疗效对比，得到Z=0.351，P=0.726＞0.05，差异无统计学意义，提示两组数据具有可比性；治疗前两组中医证候单项症状评分，P＞0.05，差异无统计学意义，提示A、B两组患者在咳嗽咳痰、痰血、气急胸闷、胸痛、神疲乏力、食欲不振、口干咽燥、自汗盗汗、大便秘结中医证候评分及总积分偏差不大，具有可比性；对照组治疗前后中医证候证候评分显示两组数据在改善咳嗽咳痰、胸痛、气急胸闷及总积分方面P＜0.05，差异具有统计学意义，而在神疲乏力、食欲不振、口干咽燥、自汗盗汗、大便秘结方面P＞0.05，差异无统计学意义；试验组治疗前后中医证候评分对比发现在改善咳嗽咳痰、胸痛、神疲乏力、食欲不振、口干咽燥、自汗盗汗、大便秘结及总积分方面两组数据P＜0.05，差异有统计学意义，而在气急胸闷、自汗盗汗上P＞0.05，差异无统计学意义，提示芪连合剂在改善气急胸闷、自汗盗汗状况的方面作用不显著；治疗后试验组与对照组中医证候评分，试验组在改善咳嗽咳痰、气急胸闷、大便秘结及中医证候总积分方面P＜0.05，差异有统计学意义，提示芪连合剂联合化疗药物优于单纯化疗组；治疗后两组患者的中医疗效水平，P=0.00＜0.05，提示芪莲合剂联合化疗药物可有效提高肺癌患者的临床治疗水平；治疗前后两组患者的ECOG评分P=0.405＞0.05，提示两组数据差异无统计学意义，具有可比性，治疗后P=0.034＜0.05，差异有统计学意义，表明芪莲合剂联合化疗药组可以降低ECOG评分，使患者体力有一定程度的提升；对比两组患者在骨髓抑制、胃肠道反应等方面的毒副反应，在白细胞数值、恶心呕吐、心功能方面P＜0.05，差异具有统计学意义，表明芪莲合剂联合化疗药物可以有效降低胃肠道恶心呕吐反应，减少骨髓抑制，改善心功能，降低患者对化疗药物的敏感性，同时两组患者在治疗过程中均未出现发热、感染、过敏、皮肤、肺、神经系统等毒副反应。 2.实验研究表明：用GraphPadPrism7.0计算四组药物干预A549细胞48h后的半数抑制浓度IC50值，分别为木犀草素-槲皮素36.73μmol/L、乌索酸-槲皮素21.5μmol/L、木犀草素-芒柄花黄素20.87μmol/L、乌索酸-芒柄花黄素15.28μmol/L，后续实验最佳浓度均以此作为标准；q-PCR实验结果基因表达量结果以2-ΔΔCT方法计算，将对照组细胞基因的表达量设为1，其他基因的相对表达量与1进行比较，大于1表明对基因蛋白起促进作用，小于表示起抑制作用，除HIF-α的2-ΔΔCT值外，其余各组因子都对细胞起明显抑制作用，乌索酸-芒柄花黄素对基因抑制作用最显著；计算细胞克隆形成率后显示，A549细胞形成的数量、体积以及克隆形成率与不同组分药物有关，且各组之间P＜0.05，差异有统计学意义，结果显示乌索酸-芒柄花黄素在抑制细胞克隆形成方面效果最优。 结论：1.芪莲合剂加减联合化疗方案，试验组在控制实体瘤体积方面与对照组差异不大，但可有效改善气阴两虚型IIIB-IV期NSCLC患者的咳嗽咳痰、胸痛、气急胸闷的症状，在减轻因化疗而产生的胃肠道恶心呕吐反应等毒副作用，提升患者的生活质量，改善患者体力状况等方面具有重要意义。 2.芪莲合剂中黄芪-半枝莲的有效活性组分分为木犀草素-槲皮素组、乌索酸-槲皮素组、木犀草素-芒柄花黄素组、乌索酸-芒柄花黄素组，研究其对人肺腺癌A549细胞株的增殖机制，木犀草素-槲皮素组、乌索酸-槲皮素组、木犀草素-芒柄花黄素组、乌索酸-芒柄花黄素四组药物均有不同程度的抑制作用，认为乌索酸-芒柄花黄素组对细胞的增殖抑制方面作用较显著。
NETL