摘要
目的 本课题组早期研究发现，与卵巢储备功能正常（NOR）的年轻女性相比，miR-221-3p在卵巢储备功能减退（DOR）的高龄女性卵巢颗粒细胞（GCs）中的表达明显降低。本研究旨在探索miR-221-3p对GCs凋亡的影响，揭示miR-221-3p参与DOR发病的可能机制。应用电针干预，探讨电针治疗DOR的疗效及可能的微观疗效机制。 方法 第一部分：首先根据生物信息学软件预测结果，通过双荧光素酶报告基因实验确定miR-221-3p的靶基因。然后通过KGN细胞分别转染miR-221-3pmimics、miR-221-3pinhibitor和miRNANC来改变miR-221-3p的表达，采用定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）和Westernblot检测各组miR-221-3p及靶基因的表达，通过流式细胞术检测miR-221-3p对GCs凋亡的影响。最后，检测靶基因在DOR和NOR患者GCs中的表达差异。第二部分：66例高龄肾虚DOR患者随机分为试验组与对照组，各33例。试验组以电针干预治疗2周期直至扳机日，选穴：关元、三阴交（双）、子宫（双）、中极。对照组仅采用与试验组相同的控制性超促排卵方案治疗，统计分析两组患者治疗前后肾虚证中医证候积分变化、促性腺激素（Gn）使用天数、Gn用量、扳机日雌二醇（E2）和孕酮（P4）水平、获卵数、2PN受精数、成胚数、优质胚胎数及优质胚胎率，采用qRT-PCR和Westernblot检测两组患者GCs中miR-221-3p及靶基因的表达水平。 结果 第一部分：1.叉头盒转录因子O1（FOXO1）是miR-221-3p的靶基因，BCL2L11不是miR-221-3p的靶基因；2.与miRNANC组相比，miR-221-3pmimics组细胞凋亡率显著降低，miR-221-3pinhibitor组细胞凋亡率显著增加，差异均有统计学意义（P＜0.05）；3.miR-221-3p的水平与FOXO1的mRNA和蛋白水平呈负相关；4.DOR组FOXO1的mRNA和蛋白水平显著高于NOR组（P＜0.05）。 第二部分：1.与对照组相比，试验组扳机日E2水平显著增高（P＜0.05）；2.试验组治疗后肾虚证中医证候积分较治疗前显著下降（P＜0.05），对照组治疗前后肾虚证中医证候积分差异无统计学意义（P＞0.05）；3.与对照组相比，治疗组2PN受精数、成胚数、优质胚胎数、优质胚胎率均显著升高（P＜0.05），但两组患者获卵数未见明显差异（P＞0.05）；4.与对照组相比，试验组患者GCs中miR-221-3p表达显著上调（P＜0.05），FOXO1的mRNA及蛋白表达显著下调，差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 1.在DOR患者中，低表达的miR-221-3p可能通过上调FOXO1的表达使GCs过度凋亡，从而参与DOR的发生；2.电针可显著改善高龄肾虚DOR患者的临床症状，提高2PN受精数、成胚数、优质胚胎数及优质胚胎率，可使miR-221-3p表达上调，FOXO1表达下调；3.电针对DOR患者卵细胞及胚胎质量的提高可能与电针通过上调miR-221-3p表达使FOXO1表达受抑制，从而减弱过度凋亡的GCs有关。
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