摘要
目的：①应用RSL3在体外培养的正常人黑素细胞中构建氧化应激状态。②从铁死亡角度观察氧化应激状态下黑素细胞的形态学和生化学等变化，以期进一步完善白癜风的发病机制，并探究黄芩素在铁死亡信号通路中的作用靶点。③通过网络药理学发掘与铁死亡及白癜风发病相关的因子。 方法：实验部分：以正常人黑素细胞为研究对象，进行传代培养。设置不同浓度梯度的铁死亡诱导剂RSL3、黄芩素和枸橼酸铁铵（FAC）作用于黑素细胞（MC），分别选取合适的浓度作为后续实验浓度。实验分为如下五组：分别为对照组、RSL3组、RSL3+FAC组、黄芩素+RSL3组和黄芩素+RSL3+FAC组，黄芩素处理组细胞与黄芩素预先孵育1h，再用RSL3或RSL3与FAC联合作用24h，以对照组细胞为对照。运用CCK-8法、电镜、流式细胞仪、FeRhoNoxTM-1探针、WesternBlot及RT-qPCR等方法，观察上述五组中黑素细胞的存活率、线粒体超微结构、线粒体膜电位、细胞内ROS、脂质ROS、细胞内Fe2+、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPx4）、转铁蛋白受体1（TFR1）相关蛋白及mRNA的表达。网络药理学部分：通过应用相关数据库及软件对白癜风及黄芩素进行网络分析。 结果：①RSL3在体外造成正常人黑素细胞氧化应激状态的合适浓度是0.06μM（IC30）。②黄芩素拮抗RSL3和FAC诱导的黑素细胞生长抑制。③黄芩素可改善氧化应激状态下黑素细胞的线粒体形态和功能障碍。④黄芩素降低RSL3诱导的铁离子水平和黑素细胞ROS（胞内、脂质）。⑤黄芩素通过增加GPx4和降低TFR1的表达来保护黑素细胞。⑥P53皆存在与铁死亡信号通路及白癜风发病机制中。 结论：①RSL3可在体外诱导正常人黑素细胞形成氧化应激状态。②黄芩素通过降低铁离子、降低ROS（胞内、脂质）、提高GPx4、降低TFR1来保护氧化应激状态下的黑素细胞。③黄芩素通过与铁离子相互作用的方式来显著降低ROS水平，而直接降低胞内ROS的效果不明显。④P53是白癜风发病潜在靶点。
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