摘要
生命系统是由能量代谢维持的，而富含碳氢化合物的脂类为许多生物体提供了能量来源。由于新的能源并不总是随时可以获取的，所以在细胞和组织中储存脂质的能力往往对生存至关重要。脂滴就是细胞内的“脂质库”。本课题通过自下而上的方式构建了人工脂滴模型，解决了天然脂滴分离纯化困难的问题，并且利用人工脂滴与脂肪酶的水解反应在巨型磷脂囊泡内观察了人工脂滴的水解行为。 人工脂滴由天然脂滴中含有的成分(磷脂和三油酸甘油酯)组成。通过实验探究不同磷脂和甘油三酯的量对脂滴乳液粒径的影响，确定了使用1mgDPPC与10μL三油酸甘油酯混合，加水至总体积为110μL制成乳液。制成的乳液在室温和4℃保存下7天内粒径不会有明显变化，说明乳液稳定性好。在乳液中加入脂肪酶，脂肪酶会破坏乳液的稳定结构，因为脂肪酶会水解一部分磷脂分子中的酰基，脂肪酶与三油酸甘油酯接触并发生水解反应。通过质谱分析确定了水解反应的产物中有油酸分子。水解反应的时间确定为2h。探究2h内不同浓度的脂肪酶对乳液水解作用，以确定一个最适浓度。在2h内既会发生水解反应又不会将反应底物耗尽，因此选择酶浓度100μg/mL。为了进一步提高乳液对脂肪酶的水解稳定性，优化了磷脂组成，并探究了电负性的影响。 用电形成的方法制备囊泡并包封人工脂滴。为了提高包封率，探究了人工脂滴的浓度对GUV包封人工脂滴包封率的影响，最终确定了浓度为30.90mg/mL三油酸甘油酯乳液，包封率在56.3%，能保证每次每组样品都能得到足够数量的人工脂滴。通过观察巨型磷脂囊泡内人工脂滴的水解行为实验，探究了不同浓度的脂肪酶对DOPC组成的囊泡的水解作用，优化了DOPC囊泡的组成。
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