摘要
目的： 口腔白斑(oralleukoplakia,OLK)为口腔黏膜上不能擦掉的白色斑块，是最常见的潜在恶性病变，目前缺乏理想的治疗药物。黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi,SBG)作为传统中药，具有抗炎抗肿瘤作用，机制包括诱导肿瘤细胞周期停滞，抑制肿瘤细胞增殖，调控细胞凋亡相关基因蛋白的表达等，与OLK的发病机制相关，具有治疗OLK的潜能。本研究应用网络药理学方法预测SBG治疗OLK的活性成分，核心作用靶点和关键信号通路，并通过体外细胞培养和分子生物学验证其预测的准确性，为后续的动物实验和临床试验提供理论依据。 材料与方法： 第一部分：通过TCMSP及SwissTargetPrediction数据库筛选SBG的活性成分和相关靶点；使用GeneCards、OMIM数据库收集OLK的潜在治疗靶点；运用Venn获取SBG-OLK的交集靶点；使用Cytoscape软件建立“药物-成分-靶点-疾病”网络，使用STRING数据库和Cytoscape软件绘制PPI网络，并通过DAVID数据库对交集靶点进行GO功能注释和KEGG通路分析；利用分子对接技术分析成分与靶点间的结合力。 第二部分：制备不同浓度SBG主要有效成分黄芩素(baicalein,BAI)作用于口腔癌前病变细胞（DOK），采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞的增殖情况，细胞划痕实验检测细胞的迁移能力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡，采用RT-PCR检测关键靶点mRNA的表达水平，采用Westernblot检测细胞关键通路靶分子的蛋白表达水平，以验证网络药理学富集分析的准确性。 结果： SBG作用于OLK的有效成分有25个，相关靶点31个，通过“药物-成分-靶点-疾病”网络分析出SBG的主要有效成分为黄芩素(baicalein,BAI)、汉黄芩素、木犀草素等；PPI分析出SBG治疗OLK的核心靶基因为AKT1、VEGFA、EGFR、HIF1A和PTGS2等；GO功能共涉及到209条生物学过程，其中包括151条生物过程（BP），17条细胞成分(CC)，38条分子功能（MF），主要影响细胞的信号转导，增殖和凋亡等；KEGG通路富集筛选出60条信号通路，其中富集水平最高的为PI3K-Akt信号通路；分子对接结果显示SBG的主要活性成分与核心靶点间具有较强的结合能力。 CCK-8毒性实验和克隆形成实验结果显示BAI呈浓度和时间依赖性地抑制DOK细胞的增殖；细胞划痕实验结果表明BAI能抑制DOK细胞的迁移；流式细胞结果表明BAI将DOK细胞阻滞在S期，并呈浓度依赖性诱导细胞凋亡，RT-PCR实验结果显示BAI可抑制核心靶点AKT1、VEGFA、EGFR、HIF1A和PTGS2mRNA的表达水平；Westernblot实验结果显示BAI通过降低PI3K、AKT、mTOR的磷酸化水平抑制关键信号通路PI3K-Akt的活化。 结论： 网络药理学筛选出SBG作用于OLK的主要有效成分为BAI，核心靶点为AKT1、VEGFA、EGFR、HIF1A和PTGS2等，关键通路为PI3K-Akt，主要成分和核心靶点具有较强的结合力；细胞学实验结果表明BAI可能通过抑制PI3K-Akt通路抑制DOK细胞增殖、诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期并抑制核心靶点mRNA的表达水平，为SBG治疗OLK的临床应用提供理论基础和科学依据。
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