摘要
背景： 主要组织相容性复合体Ⅰ（majorhistocompatibilitycomplex-Ⅰ，MHC-Ⅰ）可将肿瘤相关抗原呈递至CD8+T细胞，诱导CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞。研究表明，肿瘤细胞表面MHC-Ⅰ表达下调是引起肿瘤免疫逃逸的重要机制之一。因此影响MHC-Ⅰ组装和表达的关键蛋白，其异常表达有可能导致肿瘤免疫逃逸的发生。钙连接蛋白（Calnexin，CANX）在抗原提呈过程中作为伴侣蛋白参与MHC-Ⅰ与抗原肽的装配，但CANX异常表达与肿瘤免疫逃逸的关系尚不清楚。 目的： 1.检测CANX在结直肠癌（colorectalcancer，CRC）患者癌及癌旁组织中的表达，分析CANX与CRC患者生存的相关性； 2.分析CANX对MHC-Ⅰ的调控作用及对免疫细胞杀伤作用的影响。 方法： TCGA（TheCancerGenomeAtlas）数据分析458例CRC患者抗原加工和呈递机制（antigenprocessingmachinery，APM）相关基因与患者总体生存期的相关性，并收集94对CRC患者的癌及配对的癌旁组织，制备组织芯片，免疫组化染色检测CANX的表达水平，进一步分析CANX表达与CRC患者总体生存期的相关性；利用cBioPortal在线工具分析TCGA数据库CRC患者CANX和HLA-A、B、C表达的相关性。 在两株差异表达CANX的CRC细胞LoVo和DLD-1中分别过表达和RNA干扰CANX，分析其对MHC-Ⅰ表达水平的影响；将过表达CANX的慢病毒感染小鼠结肠癌细胞CT-26，磁珠分选荷瘤小鼠的脾脏CD8+T细胞，利用细胞毒性试剂盒检测CD8+T细胞对CT-26的杀伤作用，ELISA测定细胞因子分泌的变化；多重荧光免疫组织化学进一步检测高、低表达CNAX的CRC患者组织中CD4、CD8、PD-1、LAG3、Foxp3的表达，分析肿瘤微环境中免疫细胞浸润情况。 结果： TCGA数据分析表明CANX高表达与CRC患者总体生存期呈正相关；组织芯片染色结果表明CANX在结直肠癌组织的表达低于癌旁组织，CANX表达高，患者生存期长；cBioPortal分析表明CRC患者CANX和HLA-A、B、C表达呈正相关。 LoVo细胞过表达CANX后，MHC-Ⅰ的蛋白水平升高；RNA干扰DLD-1细胞CANX，MHC-Ⅰ表达水平下降。过表达CANX可增强CD8+T细胞对CT-26细胞的杀伤能力，且培养液中IFN-γ与TNF-α的分泌增加。CANX高表达的癌组织中，肿瘤微环境中浸润的CD8+T、CD4+T细胞多于CANX低表达癌组织，而CD8+PD-1+、CD4+Foxp3+细胞浸润情况则相反。 结论： CANX通过正向调节MHC-I表达，促进肿瘤微环境中免疫细胞浸润，可能有助于抑制免疫逃逸，增加CRC患者的生存期。
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