摘要
目的： 本研究旨在探究： 1.明确miR-6883-5p可否在乳腺癌中调控CDK4的表达； 2.细胞层面探究miR-6883-5p在乳腺癌中的生物学功能及其调控作用机制通路； 3.从组织层面研究miR-6883-5p的表达水平，评估其与临床病例相关性。 方法： 1.用miRBase、Targetscan、PicTar三个预测软件进行靶点预测，预测出来的靶基因取其交集，最终将miR-6883-5p作为后续实验研究对象。 2.运用脂质体转染的方法，分别将miR-6883-5p类似物（mimic）、miR-6883-5p抑制剂（inhibit）、miR-6883-5p阴性对照（NC）转入乳腺癌细胞，实时定量荧光PCR检测转染效率。 3.Westernblot验证乳腺癌细胞株中miR-6883-5p表达的变化对CDK4表达的影响。 4.实时定量荧光PCR检测正常乳腺上皮细胞系（MCF-10A）、乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-453、MDA-MB-231、Bcap-37）等五种细胞中miRNA-6883-5p的表达水平，选择表达倍数差异明显的MDA-MB-231、MCF-7进行后续实验。 5.cck8实验检测调控miR-6883-5p的表达后对乳腺癌细胞株增殖能力的影响。 6.transwell小室实验验证调控miR-6883-5p的表达对乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力的影响。 7.流式细胞术验证调控miR-6883-5p的表达对乳腺癌细胞株细胞周期分布，凋亡能力的影响。 8.收集山西医科大学第一医院乳腺外科2018年-2020年33例行乳腺癌改良根治术患者的部分癌组织（0.5*0.5*0.2cm，80-100g）及癌旁正常组织（大约癌旁2cm），以及完整的病历资料。运用荧光定量pcr的方法对比探究33例样本的癌组织和癌旁组织中miRNA-6883-5p的相对表达，分析miRNA-6883的表达和临床病例因素的相关性。 结果： 1.miRNA-6883-5p是CDK4的调控因子，转染miRNA-6883-5p的模拟物（mimic）后，CDK4的表达升高；转染miRNA-6883-5p的抑制物（inhibit）后，CDK4的表达降低。 2.乳腺癌细胞MCF-7,MDA-MB-453，MDA-MB-231，Bcap-37中miRNA-6883-5p的表达水平均高于乳腺上皮细胞系MCF-10A。 3.cck8实验检测结果：下调miR-6883-5p表达，两种乳腺癌细胞生长速度较对照组均降低（P＜0.05）；上调miR-6883-5p表达，两种乳腺癌细胞生长速度较对照组均升高（P＜0.05）。 4.transwell小室实验结果：下调miR-6883-5p表达，抑制乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力（P＜0.01）；上调miR-6883-5p表达，能够增强乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力（P＜0.01）。 5.细胞周期实验结果：乳腺癌细胞株MDA-MB-231中过表达或敲降miR-6883-5p，对细胞周期分布无影响（P＞0.05）。MCF-7中，过表达miR-6883-5p，对细胞周期分布无影响（P＞0.05）；下调miR-6883-5p表达，细胞周期分布出现差异，G1期细胞所占比例增多，S+G2期所占比例减少（P＜0.05）。 6.细胞凋亡实验结果：在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中过表达miR-6883-5p，细胞凋亡数量比对照组减少（P＜0.01）；抑制miR-6883-5p，细胞凋亡数量比对照组增多（P＜0.01）。乳腺癌细胞株MCF-7中过表达miR-6883-5p，细胞凋亡数量比对照组减少（P＜0.05）；敲降miR-6883-5p，细胞凋亡数量比对照组增多（P＜0.01）。 7.乳腺癌组织样本中miR-6883-5p的表达增高，高于正常癌旁组织（P＜0.05）； 8.乳腺癌细胞中miRNA-6883-5p的表达水平高孕激素受体（PR）水平与mir-6883-5p表达水平呈正相关（P＜0.05）。 结论： 1.miRNA-6883-5p是CDK4的调控因子。 2.miRNA-6883-5p在乳腺癌细胞中的表达水平高于正常乳腺上皮细胞。 3.miRNA-6883-5p能够促进乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力；能够影响乳腺癌细胞的周期分布，能够抑制乳腺癌细胞凋亡。 4.乳腺癌组织样本中miR-6883-5p的表达增高，明显高于正常组织。
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