摘要
目的： 建立耐顺铂卵巢癌细胞株，并探索耐药细胞的培养条件；观察不同浓度光敏剂DTPP在650nm连续激光下，对耐顺铂卵巢癌细胞的杀伤作用。 方法： 选用状态良好、呈对数生长的SKOV3细胞，通过采用顺铂大剂量冲击法诱导出耐顺铂的卵巢癌细胞（SKOV3/DDP），并测定耐药指数；选用耐药性稳定、状态良好且呈对数生长的SKOV-3/DDP细胞，将其分为四组：①DTPP-PDT组：用不同浓度DTPP（5、10、15、20、25μg/ml）培养后，用激光照射；②单纯光敏剂组：不同浓度DTPP（5、10、15、20、25μg/ml）培养，无激光照射；③单纯光照组：DTPP0μg/ml，用激光照射；④空白对照组：DTPP0μg/ml，无激光照射。用MTT法分别测定各组SKOV3/DDP细胞存活率；然后选用合适的DTPP浓度，在激光照射后的不同时间（0、30、60、120、180min），用Annexinv/PI双染色法测定不同时期SKOV3/DDP细胞凋亡率。 结果： 采用顺铂大剂量冲击法可获得耐药性稳定的SKOV3/DDP细胞，且其在含低浓度顺铂的培养基中生长状态良好，耐药性稳定。在DTPP-PDT作用后，用MTT法检测SKOV3/DDP细胞存活率，用单因素方差分析得出：①单纯光敏剂、单纯光照对细胞存活率无明显影响；②DTPP-PDT对SKOV3/DDP细胞有杀伤作用，且随着DTPP浓度的增加而增强。在PDT后的不同时间，采用流式细胞技术检测细胞的凋亡率，用重复测量方差分析得出：细胞凋亡率随PDT后时间的延长而增加。 结论： 通过顺铂大剂量冲击法获得的SKOV3/DDP细胞生长状态良好，耐药性稳定；DTPP-PDT对SKOV3/DDP细胞有杀伤作用，且在一定范围内杀伤效应与DTPP的浓度成依赖性，细胞以晚期凋亡为主。
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