摘要
防风是一种应用比较广泛的中药，临床上常用于治疗头痛目眩、发热、风湿痹痛、类风湿性关节炎等疾病。现代研究表明，防风具有抗炎、调节免疫及抗肿瘤等多种药理作用，还具有潜在的抗过敏作用，但防风对I型变态反应治疗的深入研究未见报道。本研究首先通过网络药理学方法，对防风作用I型变态反应的分子机制进行初步探究。其次，体外通过RBL-2H3细胞模型、体内通过诱导建立小鼠被动皮肤过敏模型，研究了防风对I型变态反应的治疗作用及其分子作用机制。主要研究内容如下： 1.网络药理学分析：通过TCMSP数据库找到防风潜在的有效成分以及作用靶点，再通过GeneCards和OMIM数据库找到与“变态反应”相关的靶点基因。将前两步靶点的交集导入David数据库进行GO富集分析。通过R软件调用Bioconductor程序包将前两步得到靶点交集进行KEGG富集分析。分析结果显示，防风可能通过多成分、多靶点调节钙离子信号、PI3K/Akt和MAPK等信号通路发挥其治疗变态反应性疾病的作用。 2.体外实验：采用CCK-8法检测防风和防风指标性成分升麻素苷对RBL-2H3细胞的毒性作用，筛选出防风和升麻素苷对RBL-2H3细胞作用的最适浓度；采用显色法和ELISA法检测二者对RBL-2H3细胞释放β-Hex和组胺的影响；利用AO/EB法检测细胞的凋亡情况以及对胞内钙离子浓度的影响；利用荧光实时定量PCR法和WesternBlot法检测了细胞脱颗粒时与I型变态反应相关的信号通路中关键基因的表达情况。结果表明：防风生药浓度在0~4mg/mL、防风的指标性成分升麻素苷在浓度0~100μg/mL时对RBL-2H3细胞没有明显毒性作用；在防风安全作用浓度范围内，防风和升麻素苷均能够抑制DNP-IgE/DNP-BSA诱导细胞释放β-Hex和组胺，且呈浓度依赖性，但对C48/80诱导细胞引起的β-Hex和组胺的释放无抑制作用；此外，防风能够明显抑制DNP-IgE/DNP-BSA诱导细胞内钙离子的释放和细胞的凋亡，但对C48/80诱导细胞释放钙离子无抑制作用；荧光实时定量PCR和WesternBlot检测结果显示，防风可能通过抑制Lyn/Syk、PI3K/AKT/NF-κB、MAPK和等信号转导途径，对I型变态反应发挥治疗作用。 3.体内实验：将防风和升麻素苷连续对小鼠灌胃给药一周，再分别使用DNP-IgE/DNP-BSA和C48/80诱导建立小鼠被动皮肤过敏反应（Passivecutaneousanaphylaxis,PCA）模型。通过检测PCA模型中小鼠耳部和足趾部EvansBlue的渗出程度以及肿胀度等指标，对防风治疗I型变态反应的治疗作用进行评价。结果显示，防风和升麻素苷均能够抑制DNP-IgE/DNP-BSA诱导小鼠耳部和足趾部PCA模型中EvansBlue的渗出和组织肿胀，表明在动物整体水平防风对I型变态反应有显著的治疗效果，但二者对C48/80诱导的小鼠PCA模型无显著的治疗作用。 综上所述，本论文通过网络药理学分析、RBL-2H3细胞试验和小鼠被动皮肤过敏试验，证明了防风对I型变态反应具有显著的的治疗作用，其可能通过Lyn/Syk/PLCγ、PI3K/AKT/NF-κB以及MAPK信号转导通路来调控变态反应的发病过程，对I型变态反应发挥治疗作用。
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