摘要
目的:优化北沙参多糖的提取工艺，开展其分离纯化，对分离纯化后各多糖组分进行结构表征及体外免疫活性研究。 方法:1.星点设计-响应面法优化北沙参多糖的热水浸提工艺;2.多糖的分离纯化，以分级醇沉及超滤法进行分级，Sevage法及活性炭吸附法进行除蛋白、脱色素，DEAE-52纤维素离子交换柱色谱法、Sephadex G75及Sephacry1TMS-200葡聚糖凝胶柱色谱法进行纯化，透析袋法进行除盐，多角度激光散射仪对纯化多糖组分进行分子量测定;3.薄层色谱(TLC)法、糖腈乙酸酯衍生化气相色谱(GC)法及1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮衍生化高效液相色谱(PMP-HPLC)法测定北沙参各多糖组分的单糖组成，红外光谱法对多糖组分进行初步的结构分析;4.MTT法检测北沙参各多糖组分对小鼠脾脏细胞增殖的影响，筛选具有体外免疫活性的多糖组分。 结果:1.北沙参多糖的最佳热水浸提工艺为:加入25倍量的蒸馏水于94.9℃条件下浸提2次，每次120min;2.北沙参粗多糖，经分级醇沉得40％乙醇沉淀组分、80％乙醇沉淀组分，经超滤得分子量＞10kDa、5kDa-10kDa、3kDa-5kDa及＜3kDa多糖组分。经柱色谱分离纯化，从40％乙醇沉淀多糖中得到了较为纯净均一的多糖组分B1-1-G1，经多角度激光散射仪测定其分子量为2.301×104;3.TLC法、GC法及HPLC法对分级醇沉、超滤多糖组分进行单糖组成分析，初步确定北沙参多糖的单糖组成以葡萄糖和甘露糖为主，并含有葡萄糖醛酸、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖和岩藻糖，B1-1-G1多糖组分由甘露糖-葡萄糖醛酸-鼠李糖-葡萄糖-半乳糖-阿拉伯糖组成，其摩尔比为81.86∶0.12∶0.17∶1259.7∶0.54∶0.33。红外光谱分析结果表明，B1-1-G1多糖主要由葡萄糖组成且糖苷键主要为α-构型。4.体外免疫活性筛选结果表明，B1-1-G1多糖组分对体外脾脏淋巴细胞的增殖具有较好的促进作用，此外，北沙参40％乙醇沉淀多糖、分子量＞10kDa多糖、分子量5kDa-10kDa多糖及其经柱色谱分离纯化后多糖组分对体外脾脏淋巴细胞的增殖也具有一定的促进作用。 结论:优选的热水浸提工艺稳定可行，具有较好的预测性;建立了北沙参多糖的分离纯化方法及其单糖组成分析方法;初步筛选出了具有体外免疫活性的北沙参多糖组分。本研究为北沙参多糖的深入研究及临床应用奠定了基础。
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