摘要
目的: 阿尔兹海默病(Alzheimer''s disease，AD)是常见的中老年神经退行性疾病，但临床上缺少有效的治疗方法。本研究拟用3xTg小鼠模拟AD模型，从脑血管损伤保护的角度探讨电针足三里对AD小鼠神经功能障碍的改善作用及关联分子机制，以期为临床上电针治疗AD提供实验依据。 方法: 将35只8月龄3xTg雌性小鼠随机分为三个组，分别为模型组、电针组、药物组，10只同龄C57BL/6雌性小鼠作为对照组。电针组针刺双侧足三里(ST36)穴，选用疏密波，频率20/100Hz，20min，强度以肌肉微微颤动为度，每天一次，一周五天，连续8周。其他组以同样的麻醉固定方式处理。电针干预后进行以下实验和考察:1）采用高架十字迷宫、埋藏食物小球测试，考察电针对AD小鼠神经功能障碍的改善情况;2）采用激光散斑脑血流成像考察电针对AD小鼠脑血供的影响;3）采用脑切片免疫荧光观察脑微血管密度变化及神经元损伤标志物，探讨电针改善AD小鼠脑供血不足的内在环节及其最终对神经元的影响;4）采用ELISA检测AD小鼠脑部褪黑素水平变化，并结合褪黑素(30mg/kg)补充治疗阐释电针足三里改善AD小鼠脑血管损伤的内在分子机制。 结果: 1、高架十字迷宫实验结果表明:模型组小鼠进入开臂次数比对照组明显减少(P＜0.01)，在开臂的停留时间明显缩短（P＜0.01），而电针组对比模型组进入开臂的次数上升（P＜0.01），停留开臂时间延长（P＜0.01），证明电针足三里可以明显改善小鼠的焦虑情绪。 埋藏食物小球实验结果表明:模型组小鼠寻找埋藏食物的潜伏期明显比对照组长（P＜0.01），电针组能有效缩短潜伏期(P＜0.01)，说明3xTg小鼠存在嗅觉灵敏度下降，且电针对于小鼠的嗅觉功能有改善效果。 2、激光散斑脑血流量实验表明:模型组小鼠的全脑灌注量显著降低(P＜0.01)，电针组有效逆转3xTg小鼠全脑灌注量不足; 免疫荧光检测脑血管实验表明:模型组小鼠的海马及前额叶皮质的脑微血管的密度（P＜0.01）和长度(P＜0.01)均比对照组减少，电针组能有效增加全脑血流的灌注量（P=0.017），以及海马和前额叶皮质微血管的密度(P＜0.01)和长度(P＜0.01)。提示3xTg小鼠的脑血流灌注量存在明显减少，脑微血管明显受损，电针组有效保护了脑血管损伤。 免疫荧光检测神经元活性关联指标的结果表明:模型组小鼠在前额叶皮质FOSB（P＜0.01)和尼氏小体(P＜0.01)的表达下降，电针组可以提高FOSB(P＜0.01)和尼氏小体(P＜0.01)的表达。在海马观察到同样的变化趋势。提示3xTg小鼠神经元活性受损，电针组有效提高了神经元活性。 3、为了进一步探讨褪黑素不足对AD神经血管损伤的影响，我们对3xTg小鼠进行褪黑素补充8周，ELISA分析电针足三里前后对3xTg小鼠褪黑素分泌水平影响，结果表明:相较于正常对照组，模型组小鼠在前额叶皮质(P＜0.01)、海马(P=-0.022）的褪黑素水平均有明显的下降，电针组提高了褪黑素水平（P＜0.01），褪黑素组提高了前额叶皮质(P＜0.01)、海马（P＜0.01）水平，提示3xTg小鼠脑组织的褪黑素水平不足，电针足三里可以提高脑组织中褪黑素水平。 免疫荧光检测脑血管结果表明:褪黑素补充治疗使AD小鼠的脑微血管损伤和脑供血不足得到有效逆转，体现在微血管密度（P＜0.01）和长度（P＜0.01）的增加，从而有效缓解了AD小鼠的神经炎症损伤和凋亡关键分子CASP3的表达。褪黑素在改善脑血管和脑供血方面的治疗效果与电针趋势一致。 结论: 电针足三里有效改善3xTg小鼠脑血管损伤，从而缓解脑微循环障碍导致的神经功能损伤。上述保护作用与提高AD小鼠褪黑素分泌不足密切相关。
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