摘要
本研究通过平板对峙法，从华中农业大学茶园等地的茶叶片上分离获得253株内生菌，其中有四株对果树多种病原真菌具有强烈生长抑制效果，将它们命名为HNt4、HNt7、HNt10、HNt20，通过革兰氏染色测定、16SrDNA、rpoB、gyrB序列测定，鉴定四株菌株均属于贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。 将菌株HNt4、HNt7、HNt10、HNt20与葡萄座腔菌苹果专化型(Botryosphaeria berengeriana f.sp.Mali)、果生链核盘菌(Monilinia fructicola)、山茶刺盘孢菌(Colletotrichum camelliae)、茶拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis theae)、拟茎点霉菌(Phomopsis sp.)、细交链格孢菌(Alternaria alternata)、果生炭疽菌(Collectotrichum fructicola)、尖孢炭疽菌(Collectotrichum acutatum)、黑根霉菌(Rhizopus sp.)、梨头霉菌(Absidia sp.)、镰刀菌(Fusarium sp.)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)等病原真菌分别进行对峙培养，结果显示四株菌株对所测试真菌均具有生长抑制作用，生长抑制率35%~71.2%。以果生链核盘菌菌株为测试菌株，测试4个菌株的无菌发酵液和挥发性物质的抑菌作用，结果显示前者对测试菌株的生长抑制率为31%～38%，后者为45%以上。显微观察受抑制的果生链核盘菌菌株发现，HNt4、HNt7、HNt10、HNt20无菌发酵液处理可以使其菌丝膨大畸形、细胞质分布不均、分隔变多。 采用不同的高温（40℃、60℃、80℃、100℃）热处理HNt4、HNt7、HNt10、HNt20无菌发酵液20min，处理后进行对峙培养，4个菌株对果生链核盘菌的生长抑制率无明显变化；采用不同的pH值（4、5、6、7、8、9、10）处理其无菌发酵液，不同处理下对果生链核盘菌的生长抑制作用差异不明显；经蛋白酶K处理后进行对峙培养，4个菌株对果生链核盘菌的生长抑制率为38.3%、60.7%、58.3%和41.1%。 选取成熟健康的皇冠梨(P.bretschneideri cv.Huanguan)果实，刺伤后分别喷施HNt4、HNt7、HNt10、HNt20发酵液，然后接种葡萄座腔菌梨专化型（即梨轮纹菌）菌丝块进行防病效果室内测定。结果显示，测定四株生防菌的原液和100倍稀释液处理均有一定的抑制腐烂的作用，原液的相对防效分别为40.7%、34.9%、33%和18.5%；100倍稀释液的相对防效分别为30.2%、26.5%、25.1%和14.7%。选取防效较好的HNt4和HNt7进一步进行大田防病实验，结果显示，HNt4在黄花梨和丰水梨上对梨锈病的防效分别为63.29%和74.03%，HNt7在这两种梨树上的防效分别为62.03%和70.76%。 提取HNt4、HNt7、HNt10、HNt20的粗蛋白，发现各菌株均存在2-4个蛋白条带,大小约50～130kDa，但四个菌株相互之间蛋白大小显著不同。将粗蛋白液与果生链核盘菌进行对峙培养，发现其对该菌菌丝生长具有显著抑制作用。 该研究从田间分离获得了4株贝莱斯芽孢杆菌，对12种病原真菌均具有良好的抑菌活性，受环境影响小，表现稳定，在田间对梨锈病表现良好的防病效果，为采用生物防治控制田间果树病害提供试材。
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