摘要
目的： 通过考察雷公藤内酯酮对U937细胞增殖抑制作用、周期分布情况、凋亡情况、RNA-seq、mRNA以及相关蛋白的表达情况的影响，雷公藤内酯酮对SHI-1细胞的增殖、细胞周期分布、凋亡及相关蛋白的表达的影响，雷公藤内酯酮对NB4细胞的增殖抑制作用以及凋亡情况的影响，探讨雷公藤内酯酮对急性髓细胞白血病的作用机制。 方法： 1.雷公藤内酯酮对白血病细胞的增殖抑制作用 MTT法检测不同浓度的雷公藤内酯酮作用于白血病细胞后对其增殖的抑制作用，并计算其半数抑制率。 2.雷公藤内酯酮对白血病细胞周期分布以及凋亡情况的影响 以U937、SHI-1和NB4细胞为研究对象，经由雷公藤内酯酮处理后，在流式细胞仪上检测其周期分布以及凋亡情况。 3.雷公藤内酯酮对U937细胞转录组表达的影响 以U937细胞为研究对象，通过高通量测序的方法对雷公藤内酯酮刺激前后的U937细胞转录组进行测序，采用基因定量和差异基因分析、GO富集分析、KEGG pathway富集以及聚类分析探讨雷公藤内酯酮对U937细胞转录组表达的影响。 4.雷公藤内酯酮对白血病细胞相关mRNA表达量的影响 qRT-PCR检测雷公藤内酯酮作用于U937细胞后，对U937细胞中mTOR、TP53、MAPK13、CREB3L3和SOCS1表达的影响。 5.雷公藤内酯酮对白血病细胞有关蛋白表达量的影响 Western blot检测雷公藤内酯酮作用于SHI-1细胞后，对SHI-1细胞中凋亡有关蛋白Caspase-3、Caspase-8和NF-κB表达的作用。 6.雷公藤内酯酮对正常大鼠心肌细胞H9C2增殖的影响 MTT法检测雷公藤内酯酮对H9C2增殖的抑制作用。 结果： 1.雷公藤内酯酮对白血病细胞的增殖抑制作用 雷公藤内酯酮作用于白血病细胞U937、SHI-1和NB4后，与对照组相比，具有明显的浓度依赖性增殖抑制作用(P＜0.05)。 2.雷公藤内酯酮对白血病细胞周期分布以及凋亡情况的影响 雷公藤内酯酮可影响U937、SHI-1细胞的周期分布（P＜0.05）;与对照组相比，雷公藤内酯酮作用于U937、SHI-1和NB4细胞后，凋亡细胞的比例显著增加（P＜0.05）。 3.雷公藤内酯酮对U937细胞转录组表达的影响 根据火山图表示，与对照组相比，雷公藤内酯酮给药组共检测到652个差异基因，其中上下调基因个数分别为427和225个。聚类分析展示了两组样本的差异基因的表达。差异基因GO富集分析到最明显的相关通路是negative regulation of JAK-STAT cascade，KEGG pathway通路富集分析到20个通路，其中与肿瘤凋亡机制较为相关的通路为MAPK signaling pathway、FoxO signaling pathway、p53signaling pathway、Jak-STAT signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、mTOR signaling pathway。上述通路中包含的关键基因有mTOR、TP53、MAPK13、CREB3L3和SOCS1，这些基因在两组间显著表达差异。 4.雷公藤内酯酮对白血病细胞相关mRNA表达量的影响 与对照组相比，雷公藤内酯酮处理组的U937细胞mTOR表达量降低(P＜0.001)、TP53(P＜0.01)、MAPK13(P＜0.05)、CREB3L3(P＜0.01)和SOCS1（P＜0.05）表达量升高。 5.雷公藤内酯酮对白血病细胞有关蛋白表达量的影响 与对照组相比，雷公藤内酯酮处理组的SHI-1细胞NF-κB（P＜0.01）、Caspase-3(P＜0.001)和Caspase-8(P＜0.001)表达量均降低。 6.雷公藤内酯酮对正常大鼠心肌细胞H9C2增殖的影响 雷公藤内酯酮对大鼠心肌细胞无明显增殖抑制作用（P＞0.05）。 结论： 1.纳摩尔级别浓度的雷公藤内酯酮即可显著抑制白血病细胞增殖，并诱导细胞凋亡。 2.抑制白血病细胞生长的机制之一可能是干扰细胞周期。 3.雷公藤内酯酮抑制U937细胞增殖的机制可能与下述一条或几条通路相关（MAPK signaling pathway、FoxO signaling pathway、p53signaling pathway、Jak-STAT signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway、mTOR signaling pathway)。 4.雷公藤内酯酮诱导SHI-1细胞凋亡可能与NF-κB相关通路有关。 5.雷公藤内酯酮对正常大鼠心肌细胞H9C2无明显毒副作用。
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