摘要
目的： 以体外实验为研究起点发现问题，以体内实验为主要研究内容印证和解决问题，利用细胞生物学、分子生物学等手段通过体内、体外试验检测金贝口服液抗呼吸道合胞病毒的效果，并进一步研究其抗病毒作用机制。 方法： 1.建立体外多种病毒感染细胞模型用于金贝口服液抗病毒种类筛选。根据筛选结果，确定主要研究对象。通过不同时间加药，初步探究金贝口服液体外抗病毒机制。 2.建立RSV鼠肺分离株感染BALB/c小鼠肺炎模型，对受试药物分为大中小三个剂量组进行药效学观察，通过小鼠各方面体征、肺指数及肺指数抑制率、鼠肺病理切片HE染色、肺组织病毒重分离及病毒含量等指标的检测，探究金贝口服液体内抗病毒效果。 3.重点研究金贝口服液对RSV感染肺炎小鼠免疫相关影响，针对实验动物血清、肺组织、脾组织进行指标测定:首先通过ELISA试剂盒方法，对小鼠血液中的抗病毒因子IL-2、IL-4、IFN-α、TNF-α浓度进行检测;RT-PCR检测肺组织中病毒载量、TLR3和TLR4的表达水平，并对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检验;使用流式细胞技术研究金贝口服液对小鼠脾脏组织中的T、B、NK细胞的调节效应。 4.采用基因芯片技术对比金贝口服液组和模型组各基因变化，根据显著变化基因推测金贝口服液的抗病毒机制。 结果： 1.从抗病毒的种类来看，金贝口服液对RSV、Cox-B3、Cox-B5、EV71、H1N1均有抗病毒作用，对H1N1、EV71作用微弱，对HSV-1无作用。确定RSV为主要研究病毒，初步机理研究表明，感染病毒前2h加药的抗RSV效果最明显，TI值为19.29。 2.体内实验验表明，通过各组间肺部病变、病理切片、病毒重分离得出金贝口服液能明显减轻鼠肺组织病变、降低鼠肺重分离病毒的滴度。 3.与模型组相比，金贝口服液可上调小鼠血液中的抗病毒因子IL-2、IL-4、IFN-α浓度，下调TNF-α浓度;可降低肺组织中病毒载量，上调TLR3和TLR4的表达水平;促进小鼠脾脏组织中的T、B、NK细胞的增殖分化。 4.与模型组比较，金贝口服液可上调基因数183，下调基因数503。 结论： 金贝口服液具有一定的抗RSV疗效，且体内效果更显著。体外实验中金贝口服液在预防期效果最好，体内实验中金贝口服液可以上调抗炎性因子、上调TLR3和TLR4水平、刺激免疫淋巴细胞增殖分化。综合实验结果表明，金贝口服液发挥抗呼吸道合胞病毒的可能机制是增强机体免疫，上调免疫相关的抗病毒因子、刺激免疫受体活化、增强淋巴细胞分化成熟。
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