摘要
在唐棣属（Amelanchier）的25个种中，桤叶唐棣（Amelanchier alnifolia）是经济价值很高的一个种，也是北美著名的经济树种。该种具有抗寒性强和土壤适应性强等特点。桤叶唐棣的果实风味可口，生物活性物质丰富，营养价值高，可鲜食或加工。它是该属中作为果树栽培的少数种之一，许多优良栽培品种来自该种或具有该种遗传基因。中国已经成功引种和栽培。该树种在发展果业和修复生态方面的发展前景广阔。 作物种质资源的安全保存具有重要的战略意义。超低温保存技术是长期保存种质资源的安全有效方法。试验以桤叶唐棣离体茎尖为材料，对小滴玻璃化超低温保存过程中的低温炼苗时间、预培养时间、预培养基蔗糖浓度、加载液蔗糖浓度、加载时间、玻璃化保护液处理时间、卸载时间、以及暗培养时间等因素进行了优化；通过桤叶唐棣11份不同基因型材料对优化参数的广谱性进行了验证；用液氮不同保存时间验证了桤叶唐棣茎尖长期保存的稳定性；通过ISSR分子标记方法对超低温保存后再生植株的遗传稳定性进行了鉴定。本研究旨在建立桤叶唐棣离体茎尖小滴玻璃化超低温保存规程，为唐棣属种质资源的超低温库保存奠定技术基础。主要研究结果如下： 1、获得的优化参数和建立的保存规程如下：从30d苗龄的组培苗上剪取长约0.5cm带顶芽茎段，在继代培养基SSM（MS+1.0mg/L6-BA+35g/L蔗糖+7g/L琼脂）上4℃黑暗条件下培养2wk。在体视显微镜下快速剥取出长约2mm带4~5片叶原基的顶芽茎尖，在预培养基PM（MS+0.3mol/L蔗糖+7g/L琼脂）上培养24h（25℃±2℃，黑暗）。茎尖在加载液LS（MS+2.0mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖）中处理20min（室温）。茎尖转入植物玻璃化保护液Ⅱ（Plant Vitrification Solution2，PVS2）处理40min（0℃）。在铝箔条（2cm×0.8cm）上（0℃）制成PVS2小滴（4.5μL），将茎尖转至小滴中，铝箔条迅速投入液氮10min，之后转入冷冻管（2ml）中并在液氮中保存1h。从液氮中取出带茎尖小滴的铝箔条，迅速转入卸载液ULS（MS+1.2mol/L蔗糖）保持20min（室温）。茎尖在SSM上黑暗培养3d（25℃±2℃），之后在正常光照和温度条件下培养。 2、用该保存规程超低温保存了桤叶唐棣11份不同基因型材料，获得的平均再生率为50.92%，最高为68.33%（‘蒂森’），最低为43.33%（Smoky-1），该技术体系具有良好的广谱性。‘蒂森’茎尖用液氮保存至90d后没有影响茎尖的再生率，该技术的保存效果稳定。 3、用ISSR的15对引物进行分子标记检测，未发现超低温保存后的‘蒂森’再生株系有变异条带，其再生植株的遗传性稳定。
NETL