摘要
Ghrelin是一种酰化肽类激素，1999年首次被鉴定并被确认为生长激素促分泌素受体的内源性配体，同时也是刺激生长激素释放和调节能量平衡的一种关键激素。Ghrelin的分泌是一个较为复杂的过程，包括mRNA转录、转录后的翻译、修饰、分泌及在体内的转运等。营养物质的摄入，体内激素水平的变化等因素都会影响到Ghrelin合成和释放。铜(Cu)作为动物生长所必需的营养成分，研究表明铜对Ghrelin的分泌有促进作用，并参与Ghrelin对机体的调控。本试验旨在探究铜对SD大鼠胃底腺Ghrelin合成和分泌的机制及其影响因素，为Ghrelin分泌的营养调控及推进Ghrelin在动物生产中的应用提供理论依据。 本试验采用完全随机化设计，选用胎次相同、健康、体重相近（72.17±1.43g）的21日龄断奶雄性SD大鼠72只，随机分为3个处理组，每个处理3个重复，每个重复8只，预饲期7d，正式期35d，自由采食和饮水。对照组A组饲喂基础日粮（大鼠专用生长维持日粮AIN-93G），试验组B组饲喂基础日粮+120mg/kg CuSO4，试验组C组饲喂基础日粮+240mg/kg CuSO4。饲养至8周龄，空腹采血并屠宰受试动物，提取胃底腺组织，冻存，待检。为进一步验证体内试验进行了体外组织块培养试验，观测培养基中添加不同浓度的铜（0，7.8，15.6和31.2μmol/LCuSO4）对SD大鼠胃底腺Ghrelin分泌的影响。 首先，为了探究日粮铜对SD大鼠胃底腺Ghrelin及生长相关激素分泌的影响，本试验通过ELISA方法检测大鼠血清中Ghrelin、酰化Ghrelin、GHRH、GH的含量，并通过荧光定量PCR及Western blot方法检测了不同水平的铜对SD大鼠胃底腺中Ghrelin O-酰基转移酶（GOAT）的mRNA及蛋白表达量。第二，为了探究日粮铜对SD大鼠胃底腺Ghrelin分泌的机制，本试验通过检测大鼠胃底腺中生长抑素（SS）及其受体sst-2、瘦素（Leptin）及Leptin Receptor的mRNA及蛋白表达量，并利用体外组织块培养方法进行了相关的验证试验。第三，为了探究日粮铜对SD大鼠胃底腺Ghrelin转录水平的影响，本试验检测了不同组别大鼠胃底腺中两种与Ghrelin合成有关的转录因子AP-1和NF-κB的活化与入核水平；同时评估了MAPK通路中三种关键酶JNK、ERK和p38的总蛋白及磷酸化水平，从转录水平上探究铜对Ghrelin合成过程中可能存在的影响。结果如下： 1.与对照组相比，添加120mg/kg铜可以显著增加大鼠血清中Ghrelin、GHRH、GH和AG含量（P＜0.05），并显著提高大鼠胃底腺中Ghrelin、GHS-R及GOAT mRNA及蛋白表达量（P＜0.05）。 2.与对照组相比，随着铜添加水平的升高，大鼠血清中SS和Leptin含量呈现先降低后升高的趋势，且B组显著低于A、C两组(P＜0.05)，A、C两组之间差异不显著(P＞0.05)；大鼠胃底腺中SS、sst-2、Leptin、Leptin Receptor mRNA及蛋白表达量与大鼠血清中SS和Leptin含量变化趋势相同。此外，体外培养试验结果与体内趋势相同。 3.与对照组相比，随着铜添加水平的升高，大鼠胃底腺中转录因子AP-1的mRNA、蛋白表达及入核水平均呈现先升高后降低的趋势，且B组显著高于A、C两组(P＜0.05)，A、C两组之间差异不显著(P＞0.05)；转录因子NF-κB的mRNA、蛋白表达及入核水平均呈现先降低后升高的趋势，且B组显著低于A、C两组(P＜0.05)，A、C两组之间差异不显著(P＞0.05)；同时添加120mg/kg铜可显著增加MAPK通路中JNK和p38的蛋白表达及磷酸化比例（P＜0.05）。 综上所述，在基础日粮中添加120mg/kg的铜可显著抑制大鼠胃底腺中SS及Leptin的表达，促进GOAT的表达，提高Ghrelin的酰化比例，进而促进Ghrelin分泌；并通过提高MAPK途径中JNK和p38的蛋白表达及磷酸化比例，影响下游氧化还原敏感转录因子AP-1和NF-κB的活化，从转录水平上一定程度的调控Ghrelin的合成过程。
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