摘要
本文对采集到黑木耳白色变异菌株进行了自交纯合、系统选育，获得了稳定遗传的纯白色黑木耳优良菌株，丰富了木耳属种质资源。对白色黑木耳菌株的原生质体制备体系进行优化。筛选木耳原生质体热灭活、紫外灭活的临界致死条件，将灭活白色黑木耳和玉木耳菌株用PEG进行原生质体融合，采用拮抗试验、菌落与菌丝形态观察、栽培出菇试验、分子生物学ISSR分析方法对融合子进行鉴定。主要研究结果如下： 1、将收集到的黑木耳白色变异菌株进行分离、纯化和栽培，选择商品性状理想的纯白色黑木耳菌株，收集孢子，通过自交育种纯合基因，获得稳定遗传的纯白色黑木耳菌株JAUH-W-591，商品名定为冰糯耳。形态学观察及分子生物学分析方法鉴定该菌株为黑木耳的白色变种。实验表明，JAUH-W-591菌株菌丝生长最适宜的碳源为乳糖，最适宜的氮源是酵母浸粉，最适培养温度范围是25～28℃，最适pH为6.5。生产实验结果表明：新品种JAUH-W-591平均产量可达到每袋干重53.5g，相较对照黑木耳黑29菌株平均增产7.1%，具有较明显的商品优势和栽培价值。 2、从菌龄、酶解液浓度、酶解时间和酶解温度4个方面进行冰糯耳原生质体制备体系优化试验。结果表明：冰糯耳原生质体制备的最佳条件为使用10d菌龄的液体菌种菌丝、2%浓度的溶壁酶，在31℃下酶解7h。在最适条件下制备冰糯耳原生质体时，产量及再生率最高。 3、分别筛选玉木耳、冰糯耳原生质体紫外灭活、热灭活的临界致死条件。结果表明：紫外灭活玉木耳3min，60℃下热灭活玉木耳20min的条件下，可以100%完全灭活原生质体。以双亲紫外灭活和热灭活为初筛标记，利用融合剂PEG进行融合，通过拮抗试验获得与亲本形成明显的拮抗线的双核融合菌株10株。PDA培养基上融合子的菌落形态兼具两亲本的特征。出菇试验中融合子R4形成黄褐色原基，R6形成淡黄色偏白的原基。采用ISSR分子标记技术对亲本和10株融合菌株进行聚类分析，将亲本和融合菌株分为两大类群。
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