摘要
目的： 本研究通过建立慢性应激（Chronic stress，CS）与咬合功能障碍（Occlusal disharmony，OD）模型，探索两个因素单独作用及联合作用是否会引起小鼠髁突的改变，并初步探讨颞下颌关节骨关节炎（Tempromandibular joint osteoarthritis，TMJ-OA）的致病机制。 方法： 1.C57BL/6小鼠适应一周后，对小鼠进行蔗糖偏好实验（Sucrose preference test，SPT）、旷场实验（Open field test，OPT）和高架十字迷宫实验（Elevated plus maze test，EPM）。之后将小鼠随机分为四组：对照（Control，C）组、慢性应激（Chronic stress，CS）组、咬合功能障碍（Occlusal disharmony，OD）组、慢性应激加咬合功能障碍（CS+OD）组。麻醉后，对OD组和CS+OD组小鼠的上下颌前牙戴数字化金属冠，建立咬合功能障碍模型；C组和CS组小鼠通过开口器保持开口3min，不粘接冠。 2.OD建模后第二天开始，对于CS组和CS+OD组小鼠，每天随机给予一种慢性应激，应激种类包括：24h光照、24h黑暗、2h束缚、24h倾斜、24h潮湿垫料、24h禁食、24h禁水等7种。 3.建模4周后，对每组小鼠分别进行SPT、OPT、EPM，观察小鼠行为学的改变，评估模型建立情况。 4.建模4周后，再次进行行为学检测后处死小鼠，取其髁突组织，在体式显微镜下观察大体形态，并进行苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色、番红O-固绿（SafraninO-fast green staining，SO）染色以及甲苯胺蓝（Toluidine blue，TB）染色，最后进行免疫组织化学染色，以检测基质金属蛋白酶13（Matrix metallo proteinase13，MMP13）、核因子kB（Nuclear factor-k-gene binding k，NF-kB）p65、Yes相关蛋白1（Yes-associated protein1，YAP1）等因子的表达。 结果： 1.建模初期，除C组外，其余3组小鼠体重减轻，且CS+OD组＜OD组＜CS组，差异有统计学意义，随后各组体重慢慢上升。 2.在建模4周后，行为学实验SPT结果显示：相较于C组，其余3组蔗糖偏好百分比均下降，CS+OD组下降最多，且差异具有统计学意义；同时，OFT结果表明：与C组相比，其余3组小鼠中央距离、中央时间均小，CS+OD组最小，差异具有统计学意义；EPM结果可见：与C组相比，其余3组小鼠总移动距离均减少，闭臂时间均增加，CS+OD组变化最大，差异具有统计学意义。 3.体式显微镜观察到：C组髁突表面连续光滑，左右对称；CS组和OD组髁突表面出现局部凹陷，左右不对称；CS+OD组髁突则出现了明显的变形。 4.HE染色发现，C组髁突软骨排列正常，界限清晰；其余3组软骨层变薄，细胞数目变少；CS+OD组髁突软骨最薄，差异具有统计学意义。与C组相比，其余3组SO、TB阳性面积百分比减少，其中CS+OD组最小，差异具有统计学意义。 5.免疫组织化学染色分析发现：与C组相比，其余3组MMP13、NF-kB p65阳性细胞数百分比均增加，而YAP1阳性细胞数百分比减少，差异具有统计学意义。其中CS+OD组与C组相差最多。 结论： 1.本实验较为成功地建立了慢性应激与咬合功能障碍模型，模型会导致不同程度的行为学改变，两者联合作用时行为学改变最为明显。 2.慢性应激和咬合功能障碍均使小鼠髁突出现了骨关节样病变，炎症机制平衡被打破，而两者联合作用造成的病变更明显。
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