摘要
实验目的：环孢素A（CsA）和立他司特（Lifitegrast）是FDA批准的两款治疗干眼症的眼药，对于干眼症患者，尤其是老年患者来说，频繁多次滴眼液是一个很大的挑战，患者依从性很差。该研究旨在探索用于治疗干眼的微米级CsA/Lifitegrast缓释药膜结膜下植入的可行性和药效学。 方法：用喷涂法制造一种可生物降解的CsA/Lifitegrast复合药膜，完成厚度和载药量的测定后，将药膜缝在兔右眼结膜下距离角巩膜缘3mm的位置。于药膜植入后第3、7、14、21和28天，进行眼科裂隙灯检查，评估结膜充血、前房闪辉、前房细胞、角膜荧光素钠染色和虎红染色情况，并且第0、7、14、21和28天，在球结膜11点和1点的位置使用5mm滤纸进行结膜印迹细胞学检查（CIC）。植入药膜的白兔于植入后每周进行一次双眼眼压测量，处死前进行双眼ERG检查。在确定药膜的安全性后，对药膜进行扫描电镜（SEM）分析、傅里叶红外变换光谱分析(FTIR)和差示扫描量热实验(DSC)以表征药膜。用超高效液相色谱（UPLC）测量该药膜预定时间点体外释放的药物浓度。进行药效学评估时，将该药膜和空白膜植入兔右眼结膜下（作为给药组和对照组）：药膜植入2w后，右眼用0.1%的苯扎氯胺（BAC）溶液诱导干眼模型，连续点药14天，每天2次，左眼点生理盐水作为该兔子本身的对照眼。并且于点药第0，3，7，10，14天，对结膜充血、角膜水肿、角膜染色进行评分，两组动物各一半数量于点0.1%BAC14天后处死，两组动物剩下的一半继续观察到停BAC后7天。所有动物处死后眼球分为两半，一半眼球做石蜡切片，一半眼球做冰冻切片。石蜡切片用于Hamp;E染色观察角膜和结膜的组织形态变化，冰冻切片用于做免疫荧光观察结膜组织上的黏蛋白MUC5AC。 结果：我们的安全性评估显示无不良反应出现，兔眼在术后未见结膜充血、角膜水肿、角膜染色和前房细胞反应；结膜杯状细胞计数在实验组和对照组间无明显差异，双眼ERG检查给药眼和对照眼显示无明显差异。在第6周，处死动物做病理切片验证了药膜植入的安全性。用于表征的药膜经测量平均厚度为165±3.54μm，对应的两种药物的载药量分别为：28.1±0.22%（CsA），30.09±0.48%（Lifitegrast）。SEM显示药膜基质均匀且无明显结晶；FTIR显示了药物的特征性化学官能团；DSC显示了复合药物膜内各药物的主要吸热峰。体外释放结果显示，复合药膜使Lifitegrast实现了长达50天以上的药物释放，而单纯的裸药仅体外释放一周不到；对于CsA虽然释放时间比Lifitegrast短但仍然比CsA裸药释放时间长。在临床前药效学研究中，植入复合药物膜的眼睛在0.1%BAC滴眼14天时，与对照眼相比，结膜充血（药膜组结膜充血评分中位数vs空白膜组结膜充血评分中位数：1vs2，p＜0.001）、角膜水肿（药膜组角膜水肿评分中位数vs空白膜组角膜水肿评分中位数：0vs1，p＜0.001）、角膜染色（药膜组荧光素钠染色评分中位数vs空白膜组荧光素钠染色评分中位数：0vs10，p＜0.001；药膜组虎红染色评分中位数vs空白膜组虎红染色评分中位数：2vs6，p＜0.001）和角膜新生血管（药膜组角膜新生血管评分中位数vs空白膜组角膜新生血管评分中位数：0vs1，p＜0.001）形成明显减轻，广义logistic回归分析，用体重、性别、BAC持续时间进行校正。这种治疗效果同样反映在CIC的杯状细胞计数上（药膜组杯状细胞vs空白膜组杯状细胞用均值±标准差表示为653±136/mm2vs398±176/mm2，p＜0.001），广义线性回归分析，用体重、性别、BAC持续时间进行校正。停止BAC滴眼后，治疗组和对照组的临床体征和杯状细胞计数均恢复较快，但停药7天后植入药膜组恢复明显更快。免疫组化结果显示BAC滴眼14天后药膜组MUC5AC荧光密度比高于空白膜组（3.19±1.31/HPvs1.54±0.28/HP，p＜0.001）；停止BAC滴眼7天后药膜组与空白膜组MUC5AC荧光密度比为3.94±1.69vs2.19±0.81，p＜0.001(student''sttest)。 结论：环孢素A/立他司特复合P(LLA-CL)药膜植入兔结膜下是安全的。复合药膜能够同时释放CsA和Lifitegrast至少一个月并且在BAC诱导的干眼模型中观察到显著的治疗效果。这种结膜下给药可以发展成一种微创给药系统，用于帮助每天需要多次使用滴眼液但依从性差的干眼症患者。
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