摘要
背景与目的：结直肠癌的全球发病率已经达到所有癌症之中的第三位，且死亡率排至第二位。结直肠癌在我国有较高的发病率，且逐年上升趋势明显。宽缨酮（Eurycomanone,EN）是提取自马来西亚传统药物东革阿里（EurycomalongifoliaJack）根部的一种苦木素二萜类化合物。文献报道，宽缨酮具有较好抗肺癌和乳腺癌的作用，是东革阿里主要活性成分之一。本文将通过自噬和血管生成两方面展开，探究EN抗结直肠癌的药理学机制。 方法：MTT法评估不同浓度EN处理24h，48h，72h对人源肿瘤细胞的活力抑制作用，并计算48h的IC50；细胞克隆实验观察不同浓度EN处理48h对结直肠癌细胞增殖的抑制作用；血管生成实验比较EN等天然药物单体成分抑制脐静脉内皮细胞在Matrigel上生成血管的能力；划痕实验考察在有无VEGF时，EN处理48h对结直肠癌细胞迁移能力的影响；蛋白免疫印迹实验从蛋白表达量的增减说明不同浓度EN处理或作用不同时长后mTOR通路蛋白活性的改变；流式细胞术检测细胞内荧光信号强弱变化来判断EN作用24h后结直肠癌细胞发生的变化；通过共聚焦实验拍摄细胞内荧光信号的变化（数量、强度、共定位）体现EN作用后生物反应的发生或强度变化。 结果：第一部分抗肿瘤药效分析，MTT实验表明EN对多种人源肿瘤细胞有显著的抑制作用，其中对HCT116、SW620结直肠癌细胞的抑制作用最优，也通过克隆实验验证了EN抑制HCT116、SW620细胞增殖；第二部分抗血管生成药效分析，EN对脐静脉内皮细胞的血管生成抑制作用显著，同时EN也能抑制VEGF诱导的细胞增殖、血管生成、迁移和VEGFR2激活；第三部分EN抗肿瘤机制研究，蛋白免疫印迹实验和共聚焦实验结果表明，EN能抑制HCT116、SW620细胞自噬，EN通过影响mTOR上游的ERK和TSC2激活mTOR，进而抑制细胞保护性自噬。此外，EN还能通过抑制自噬抑制HCT116细胞血管生成，并调控细胞内ROS和GSH的水平。 结论：EN对结直肠癌肿瘤细胞活力和脐静脉内皮细胞血管生成有显著的抑制作用。EN通过mTOR通路介导的自噬与血管生成抑制，发挥抗结直肠癌的作用；EN抗肿瘤活性确切，作用机制新颖，是潜在的抗肿瘤新药或先导化合物。
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