摘要
目的： 通过研究8-氯腺苷对乳腺癌细胞增殖迁移侵袭的影响及其对乳腺癌中ADAR1的启动子转录调控机制以了解8-Cl-Ado在抗乳腺癌中的作用方式，寻找8-Cl-Ado在抗乳腺癌中的作用机制和对应靶向治疗的新的靶点，同时为8-Cl-Ado治疗乳腺癌奠定可靠的科学基础，和靶向基因治疗的新的科学依据和研究基础。 方法： 10μmol/L的8-氯腺苷作用于不同的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231不同时间，然后通过CCK-8，平板克隆检测细胞的增殖情况，细胞的迁移和侵袭情况通过Transwell技术来检测，其周期和凋亡使用流式细胞术进行检测；ADAR1过表达后采用CCK-8检测细胞的增殖情况，Transwell检测细胞的迁移和侵袭情况；10μmol/L的8-Cl-Ado作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7不同时间后，RT-PCR检测ADAR1mRNA表达水平，Westernblotting检测ADAR1蛋白表达水平变化；构建ADAR1启动子的PE-GFP-N1荧光载体以及对应的双荧光素酶报告载体，10μmol/L的8-Cl-Ado处理48h后Westernblotting检测对应的GFP蛋白表达水平变化，倒置显微镜拍摄细胞荧光强度变化，找到相关作用转录因子片段，生物信息学分析确定转录因子；双荧光素酶报告实验、染色质免疫共沉淀验证转录活性；转录因子敲低后检测细胞的迁移和侵袭情况。 结果： 1．10μmol/L的8-Cl-Ado对乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力存在抑制作用； 2．在乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中，ADAR1过表达会增强其增殖、迁移和侵袭能力； 3．乳腺癌细胞中ADAR1蛋白和mRNA的表达水平随着8-Cl-Ado处理时间的增加而逐渐降低； 4．8-Cl-Ado处理ADAR1启动子不同片段荧光载体后，荧光强度发生改变，可以找出含有相关调控转录因子的启动子片段； 5．双荧光素酶报告实验验证确定转录因子为PU.1； 6．染色质免疫共沉淀验证转录因子PU.1； 7．PU.1敲低影响乳腺癌细胞的增殖迁移侵袭； 结论： 1．8-Cl-Ado能抑制乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭，且在48h及72h效果较好； 2．ADAR1能够调控乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭； 3．8-Cl-Ado能通过影响ADAR1在乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中的表达变化来影响其增殖、迁移和侵袭； 4．8-Cl-Ado通过影响ADAR1启动子上的转录因子下调ADAR1进而调控乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的侵袭、迁移和增殖； 5．PU.1调控乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力； 6．8-Cl-Ado通过PU.1调控ADAR1进而调控乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力。
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